眾所周zhi，多細胞生物在發(fā)育過程中，存在著多種預(yù)定的、受到精確控制的細胞程序性死亡，例如細胞凋亡（Apoptosis）、程序性壞死（Necroptosis）、細胞焦亡（Pyroptosis），以及鐵死亡（Ferroptosis）等。

就在近日，2022年3月17日，哈佛-MIT博德研究所的研究人員在國際頂尖學術(shù)期刊 Science 上發(fā)表了題為：Copper induces cell death by targeting lipoylated TCA cycle proteins 的研究論文。

Todd Golub 團隊從2019年開始一直致力于研究銅死亡的相關(guān)機制，他們發(fā)現(xiàn)了兩種可以將銅離子運載穿過細胞膜的小分子，這種銅載體可以殺死特定的耐藥癌細胞。其中一種分子Elesclomol還作為潛在抗癌藥物進入了臨床試驗，但最終并未在在癌癥患者身上顯示出療效，當時也還不清楚這種分子究竟是如何發(fā)揮作用的。團隊發(fā)現(xiàn)，與銅離子結(jié)合的分子會殺死細胞，而且這種細胞死亡方式不同于已知的細胞死亡方式，因此他們決定進一步探索銅是如何殺死癌細胞的。研究團隊首先開始驗證銅載體的細胞毒性源于銅本身的假設(shè)，他們發(fā)現(xiàn)，許多不同的與銅例子結(jié)合分子或離子載體以類似的方式誘導(dǎo)細胞死亡，并且這一過程*取決于銅的可用性。當研究團隊阻斷已知的細胞死亡方式（例如細胞凋亡、鐵死亡等等）時，用銅載體處理的細胞仍然會死亡。研究團隊認為這是一種新的細胞死亡方式，并將其命名為——Cuprotosis（銅死亡）。

下面我們來具體看看這項研究究竟做了些什么？

研究人員首先在489個細胞系中測試了1448個載銅藥物對細胞的殺傷效果，結(jié)果表明載銅藥物elesclomol對幾乎所有的細胞系均有殺傷作用。但是，改變這些化合物的銅結(jié)合能力會導(dǎo)致細胞殺傷能力的喪失。于是，研究人員以銅結(jié)合分子Elesclomol為研究對象，發(fā)現(xiàn)單獨加入Elesclomol不影響細胞的生長，而一旦加入銅離子，細胞生長受到極大抑制。相反，加入其他金屬，例如鐵、鈷、鋅、鎳等，未能增強細胞死亡，這些結(jié)果表明銅離子載體誘導(dǎo)的細胞死亡主要依賴于細胞內(nèi)銅的積累。為進一步驗證銅對細胞的影響，研究人員使用丁硫胺酸亞砜胺（BSO，消耗細胞內(nèi)銅螯合劑谷胱甘肽）聯(lián)合Elesclomol處理細胞，結(jié)果同樣誘導(dǎo)細胞死亡。而采用四硫代鉬酸鹽（TTM，一種銅螯合劑）聯(lián)合Elesclomol處理細胞，則細胞生長不受影響。這些結(jié)果表明，銅離子載體誘導(dǎo)的細胞死亡主要依賴于細胞內(nèi)銅的積累。更重要的是，研究人員發(fā)現(xiàn)銅離子載體誘導(dǎo)的細胞死亡是一種新的細胞死亡途徑，明顯區(qū)別于傳統(tǒng)死亡方式（凋亡，鐵死亡，壞死）。

研究人員觀察到更依賴線粒體呼吸的細胞對銅離子的敏感性比進行糖酵解的細胞高近1000倍。如果采用藥物干預(yù)線粒體功能后，細胞對銅離子的敏感性發(fā)生顯著變化。通過乏氧條件培養(yǎng)細胞，研究人員進一步證實了銅誘導(dǎo)的細胞死亡需要線粒體呼吸參與，而糖酵解產(chǎn)生的ATP方式，對銅誘導(dǎo)的細胞死亡影響較?。匪剐【帲哼@提示腫瘤細胞似乎更耐受銅死亡？）。

進一步研究人員發(fā)現(xiàn)銅并不直接參與電子傳輸鏈（ETC），而只是在三羧酸（TCA）循環(huán)中發(fā)揮作用。經(jīng)代謝組學研究發(fā)現(xiàn)，對銅敏感細胞中與TCA相關(guān)的代謝物明顯更多。這些結(jié)果表明銅誘導(dǎo)的細胞死亡與線粒體代謝之間緊密聯(lián)系，銅與TCA循環(huán)之間息息相關(guān)。

為了確定介導(dǎo)銅毒性的特定代謝途徑，研究人員通過多重CRISPR基因敲除篩選，確定了促進銅誘導(dǎo)死亡的關(guān)鍵基因--鐵氧還原蛋白1（FDX1），發(fā)現(xiàn)該基因編碼一種Elesclomol可直接靶向的蛋白，該蛋白可將二價銅離子轉(zhuǎn)化更毒的一價銅離子。FDX1基因此前還發(fā)現(xiàn)在肺癌，PCOS等中起重要作用。

發(fā)現(xiàn)敲除FDX1會減弱銅離子載體誘導(dǎo)的細胞死亡。此外，當細胞在糖酵解條件下生長時，大多數(shù)銅離子載體（如elesclomol、disulfiram和NSC319726）失去了殺傷活性。這些結(jié)果進一步說明銅與線粒體代謝聯(lián)系十分緊密，而且與FDX1有關(guān)。

研究人員發(fā)現(xiàn)敲除FDX1或脂?；嚓P(guān)酶可以使細胞免于銅毒性。因此，作者猜測FDX1可能是蛋白質(zhì)脂?；纳嫌握{(diào)節(jié)因子。為了驗證這一猜測，作者首先通過檢索公共數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)FDX1和硫辛酸代謝與細胞存活高度相關(guān)。其次，作者對208例人類腫瘤標本進行了FDX1和硫辛酸的免疫組織化學染色，進行了半定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FDX1和脂?；鞍椎谋磉_高度相關(guān)。

最后，作者通過免疫印跡和免疫組織化學檢測，發(fā)現(xiàn)FDX1基因敲除導(dǎo)致蛋白質(zhì)脂酰化*喪失，同時也導(dǎo)致細胞呼吸顯著下降。這些結(jié)果均表明FDX1是蛋白質(zhì)脂酰化的上游調(diào)節(jié)因子。此外，作者還發(fā)現(xiàn)銅干擾鐵硫簇，而鐵硫簇是幾種關(guān)鍵代謝酶的一部分。當這種酶降低時，細胞更容易死亡。

總的來說，該研究提出了銅依賴性的新型細胞死亡方式——Cuprotosis（銅死亡），并進一步揭示了銅死亡的具體機制。這些發(fā)現(xiàn)將有助于研究銅失調(diào)疾病（例如威爾遜?。?/span>。