使用小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒檢測過程中值得關(guān)注的問題

濃縮：由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。

濃縮方式：氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。

注意：1在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。2在吹樣本時，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。3樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結(jié)果。4不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。5 凈化：經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程，我們稱為小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是：液液分配法。

比如：用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復(fù)溶液渦動后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可以60℃水浴加熱，至乳化現(xiàn)象消失或減弱后，加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。

實例：

A、氟喹諾酮類藥物試劑盒現(xiàn)有的水產(chǎn)樣本前處理方法中，用二氯甲烷作為提取劑。

注意：

 (a)二氯甲烷的密度比水大，離心完后，二氯甲烷在下層，須先用加樣器吸盡上層廢液后，再按要求取適量的下層吹干。

 (b)在用加樣器吸取下層的有機(jī)相時，正常操作往往取量不準(zhǔn)確，此時用帶有刻度，且刻度較準(zhǔn)確的玻璃管來定量。

 (c)上訴情況對有經(jīng)驗的試驗員還可以通過靈活控制加樣器來控制取樣的準(zhǔn)確性。

 (d)在振蕩過程中要注意安全。二氯甲烷在振蕩的過程中，如果離心管密封性不是很好，往往容易爆開；在進(jìn)行振蕩時，不要讓離心管口對準(zhǔn)自己或者其他人，避免濺到自己或者他人身上。

 (e)小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒在使用前充分回溫很必要，如回溫不充分該項目曲線受影響較明顯。

B、硝基呋喃代謝物檢測過程中常見問題

 硝基呋喃代謝物有四種：3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-2-內(nèi)酰脲(AHD)在檢測過程中也需要同其它項目一樣進(jìn)行添加回收測評，其中需要注意以下幾個問題。

  代謝物在組織中是與蛋白呈結(jié)合狀態(tài)，采用普通的有機(jī)溶劑或緩沖液，是無法提取該代謝物的。需要用鹽酸水解后才能使呋喃類代謝物游離，所以在加入去離子水、鹽酸和2-硝基苯甲醛(2-NBA)混合均勻后，其pH應(yīng)在1-3之間，否則不利用水解代謝物。

在衍生化過程中，溫度和時間決定其衍生化產(chǎn)率，衍生化后在加入氫氧化鈉和磷酸氫二鉀時，其pH應(yīng)在中性左右。由于部分樣本的緩沖能力不同，所以需對其pH進(jìn)行測定，因為在酸性或堿性環(huán)境中，不利于呋喃類代謝物的提取回收，同時也容易出現(xiàn)假陽性。

小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA試劑盒結(jié)果判斷定性測定 

  定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗，呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。

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