cDNA*鏈合成試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒提供合成cDNA*鏈所需要的全部試劑。其原理是用莫洛尼氏鼠白血
病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV RT）高效合成mRNA的全長(zhǎng)cDNA拷貝。在基因特異性
引物存在條件下，此單鏈cDNA產(chǎn)物可直接用來(lái)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，或進(jìn)行其它下游操
作，cDNA*鏈合成試劑盒包括合成cDNA第二條鏈、構(gòu)建cDNA文庫(kù)、核酸雜交等?；贠ligo(dT)引物
的cDNA合成原理如下：
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源RNase H活性低。
2. zui長(zhǎng)可合成13 Kb的cDNA。
3. 可以使用oligo-dT、隨機(jī)引物和RNA專(zhuān)一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提
供）。
4. 總RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA均可作為模板。
5. 可用于cDNA文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。
使用及效果
在無(wú)菌管中加入1-10 μ L（1 ng-2 μ g）總RNA ，1 μ L引物，加無(wú)核酸酶污染
水補(bǔ)至13 μ L，70℃加熱5分鐘后立即冰浴，再加入5 uL RT Buffer（含dNTP），
37℃保溫5分鐘。繼續(xù)向反應(yīng)液中加入2 μ L M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶（含RI），反應(yīng)終體
積 為20 μ L。42℃溫育1小時(shí)。70℃ 保溫10分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待
用。反應(yīng)產(chǎn)物即為cDNA。17-0130    NcoI    200U    190    10-77
17-013-96    10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯長(zhǎng)尖 )    96 支    110    1-68
17-014-1000    200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝 )    1000 支    180    1-68
17-0150    NdeI    400U    190    10-77
17-015-1000    200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝帶芯 )    1000 支    750    1-68
17-0160    NotI    150U    190    10-77
17-016-96    200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 盒裝 )    96 支    45    1-68
17-017-1000    200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 盒裝已滅菌 )    1000 支    59    1-68
17-0180    PstI    1000U    90    10-77
17-018-96    200μLRNase-free 黃吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯 )    96 支    110    1-68
17-0190    PvuII    1000U    190    10-77
17-019-1000    1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 袋裝 )    1000 支    180    1-68
17-0200    RsaI    200U    190    10-77
17-020-1000    1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 袋裝帶芯 )    1000 支    830    1-68
17-0210    SacI    500U    190    10-77
17-021-100    1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝 )    100 支    59    1-68
17-0220    SalI    1000U    190    10-77