禽正呼腸孤病毒RT-PCR試劑盒

Avian Orthoreovirus

產(chǎn)品及特點

禽正呼腸孤病毒(Avian Orthoreovirus)會引起禽呼腸孤病毒感染，是雞的一 種傳染性疾病，可引起雞多種疾病，包括病毒性關節(jié)炎、矮小綜合征、呼吸道疾 病、腸道疾病和所謂吸收不良綜合征。急性感染時，可見跛行，有些雞發(fā)育不良。 慢性感染跛行更顯著，有一小部分病雞的踝關節(jié)不能活動。有時可能看不到關節(jié) 炎/腱鞘炎的臨診癥狀，但在屠宰時可見趾屈肌腱區(qū)域腫大。這樣的雞群增重慢， 飼料轉換率低，總死亡率高，屠宰廢棄率高，屬于不明顯感染，因此靈敏快捷的 診斷產(chǎn)品具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領域快速定 量檢測禽正呼腸孤病毒。它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)禽正呼腸孤病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間 轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

禽正呼腸孤病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 禽傳染支氣管炎病毒 通用 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E6 拷貝/μL， 10μL 相當于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中， 充分混勻，此為 100 倍稀釋液。）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加 水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂?水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數(shù)為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽性對照無擴增產(chǎn)物， 則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產(chǎn)物、 陽性對照有預期擴增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有 預期 674bp 大小的擴增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。