禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒

Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC)

產(chǎn)品及特點

禽致病性大腸桿菌 O1 血清型（Avian Pathogenicity Escherichia coli， APEC）會引發(fā)大腸桿菌敗血癥，尤其在冬季發(fā)病率高，死淘率通常在 5%-20%， 嚴(yán)重的可達 50%，雛雞在夏季也較多發(fā)，病雞精神不振，采食減少，衰弱和死 亡，病雞腹部膨滿，排出黃綠色的稀便，特征性的病變是纖維素性心包炎，氣 囊混濁肥厚，有干酪樣滲出物，肝包膜呈白色混濁，有纖維素性附著物，有時 可見白色壞死斑，脾充血腫脹，給養(yǎng)殖業(yè)帶來較大的經(jīng)濟損失，因此禽致病性 大腸桿菌 O1 血清型檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量 PCR 原理開 發(fā)，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增非洲豬瘟病毒，與其他病原沒有交 叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。 

禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作 為 PC。另外用水作為 NC。 

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)細菌 DNA 提取試 劑盒兼容。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。