皰疹病毒LAMP試劑盒

B Virus(BV)B

產(chǎn)品及特點

B 皰疹病毒（B Virus，BV）又稱猴皰疹病毒 I 型，其因感染猴類而得名， 但是當人被感染 BV 的猴咬或抓傷后也可發(fā)生皮膚損害，會出現(xiàn)淋巴結炎及流 感樣綜合征，甚而并發(fā)病毒性腦炎。發(fā)病部位主要是皮膚、淋巴，相關癥狀為 口咽部水皰狀損害、疲勞、肌痛、皰疹，同時也會帶來頭痛的并發(fā)疾病，對人 體健康具有重要危害，因此 B 皰疹病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有 著重要作用。本公司在自己開發(fā)的技術基礎上開發(fā)了簡單快捷的 B 皰疹病 毒雙染料 LAMP 試劑盒，它具有下列特點：

1. 一般 60 分鐘內出結果（取決于靶分子濃度），比 PCR 快約 1 小時。

2. 對 20 μL 的反應體系，大樣品加樣量達到 14 μL。

3. 含可見光和熒光染料，既可以用金屬浴和水浴擴增用可見光肉眼判斷結果， 也可用熒光 PCR 儀進行實時熒光檢測。

4. 內含的 dUTP-UNG 可防交叉污染。

5. 特異性比 PCR 高，因為 LAMP 擴增使用 4-6 條引物而不是兩條。

6. 假陰性率低。

7. 提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結果。

8. 只可用于科研，只可進行定性檢測，不能用于定量檢測。

9. 本產(chǎn)品只適用于 LAMP 檢測，不適用于進行 RT-LAMP 檢測。

10. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20 μL 體系的 LAMP 擴增和檢測反應。

皰疹病毒LAMP試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個樣品制備，包括一個樣品制備陽性對 照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）。樣品使用量根據(jù)所選擇的試劑 盒決定。如果樣品使用量為 XmL，則在 XmL 水中加 10 μL 試劑盒提供的 陽性對照（1 萬拷貝），樣品制備陰性對照是直接用 X mL 水作為陰性對照， 然后和 N 個樣品一起進行 DNA 提取操作，得到 N+2 個 DNA 樣品。

二、雙染料 LAMP 擴增及檢測（20μL 體系）

3. 反應設置：如果有 N+2 個 DNA 純化樣品，則設置 N+4 個 LAMP 擴 增，增加 LAMP陰性對照和 LAMP 陽性對照各1個。在 N+4個 0.2mL PCR 管中加入下列成分：

4. 置混勻后進行擴增。由于本產(chǎn)品含雙染料，可以根據(jù)實驗室條件選擇下列 兩種方式進行擴增和檢測。

5. 如果使用金屬浴或水浴，則必須先在每個反應管中加 30 μL 石蠟油，否則 保溫期間反應體系的水分會蒸發(fā)，影響反應效率。65℃保溫 120 分鐘。

6. 如果使用熒光定量 PCR 儀：設聚合溫度 65℃，1 次循環(huán) 1 分鐘，120 個 循環(huán)，每分鐘在 FAM 通道采集一次熒光信號。

三、結果分析及解讀

7. 如果是用水浴或金屬浴進行的擴增，反應結束后只能肉眼判斷結果。將反 應管放置在白色背景（如白紙）前觀察。擴增陽性對照管內反應液將呈現(xiàn) 藍色，無模板和無引物的陰性對照將呈淺藍色。如果擴增陽性對照管內反 應液不呈現(xiàn)藍色，或無模板和無引物的陰性對照任何一個呈現(xiàn)藍色，則說 明試劑有問題，實驗無效。請跟廠家聯(lián)系。

8. 如果實驗有效，則樣品管的顏色接近擴增陽性對照管則說明有擴增，如果 接近無模板和無引物的陰性對照，則說明無擴增。反應結果示例如下（9 為陰性，10 為陽性）：

9. 反應結束后，如是用熒光 PCR 儀擴增，則可分析擴增曲線和 Ct。試劑盒 提供的陽性對照的 Ct 將小于 60，如果大于 60，說明試劑可能失效，需跟 廠家聯(lián)系。無模板陰性對照和無引物陰性對照的 Ct 將大于 120。如果任 何小于 60，則說明試劑或環(huán)境被污染，需重復實驗或跟廠家聯(lián)系。如果對 照結果正常，說明實驗有效，再分析樣品。樣品的 Ct 在 60 以下的為陽性， 90 以上的為陰性，60-90 之間的為疑難樣品，需要重復一次，如果還在 60-90，需要電泳檢測。

10. 當實時熒光檢測和可視化檢測同時使用時，如果不一致，以實時熒光 LAMP 的數(shù)據(jù)為準。一般可視化結果滯后實時熒光檢測結果 20-30 分鐘，也就是 說，在 qPCR 儀上第 30 分鐘時呈現(xiàn)陽性的樣品，其顏色變化在第 50-60 分鐘時才能觀察到。