犬細小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

Canine Parvo Virus(CPV)

產(chǎn)品及特點

犬犬細小病毒(Canine Parvovirus，CPV)在分類上屬細小病毒屬細小病毒科，是一 種單鏈 DNA 病毒。CPV 是感染犬、貓、狼、狐等動物并引起細小病毒病，感染率高達 100%，致死率 10-50%。PCR 是目前檢測 CPV 的方法，本產(chǎn)品就是定性 PCR 產(chǎn)品（產(chǎn)品編號 11-150）基礎(chǔ)上升級的定量 PCR 檢測試劑盒，專門用于定量鑒定檢 測 CPV。本試劑盒具有下列特點：

1. 根據(jù) CPV 衣殼蛋白基因 VP2 設(shè)計的針對 CPV 的 PCR 引物，專一性強。

2. 即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。

3. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。

4. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應體系的熒光定量 PCR。

5. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。 

犬細小病毒染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準備區(qū)、C 袋的陽性對照跟 A 袋 和 B 袋的成分分開放置)，有效期一年。 

自備試劑  DNA 模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容，也可以選購本公司的柱式病毒 DNAout。

二、引物的制備（在樣品制備室進行）

2. 按引物標簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物試管上 的標簽），使得兩條引物的濃度均為 10 μM（10pmol/μL），然后各取 110 μL 混合在一起，標注為引物混合物，放冰上待用。此引物混合物足夠 100 次 PCR。

三、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于陽性對照濃度非常 高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他 成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照， 只提供可以直接使用的長為 180bp 的 DNA 段作為陽性對照。

3. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。

5. 在 7 號管中加入 5 μL 本試劑盒提供的 10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得 10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分 震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/ μL 的陽性對照。放冰上待用。

8. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，得 10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放 冰上待用。重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

三、設(shè)置 PCR 反應（20 μL 體系，在樣品制備室進行）

9. 在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復，下表只列出一次。樣品管 和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲存好后后加）： 

10. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR（可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

11. 數(shù)據(jù)采集 在每個循環(huán)的第二步進行熒光信號的采集，具體操作按所用儀器推薦的流程進行。 本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時，大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時的大吸收光譜在 500 nm，大發(fā)射光譜在 530 nm。

四、數(shù)據(jù)處理

12. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品 濃度的 log 和標準曲線計算出樣品 DNA 的濃度。