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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0194	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

基孔肯尼雅病毒RT-PCR試劑盒

Chikungunya Virus(CHIKV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

基孔肯尼雅病毒(Chikungunya Virus，CHIKV)是一種 RNA 病毒，會(huì)引起基孔肯雅病，發(fā)熱病人常突然起病，寒戰(zhàn)、發(fā)熱，體溫可達(dá) 39℃，伴有頭痛、惡心、嘔吐、食欲減退，淋巴結(jié)腫大。一般發(fā)熱 1~7 天即可退熱，約 3 天后再次出現(xiàn)較輕微發(fā)熱，持續(xù) 3~5 天恢復(fù)正常，有些患者可有結(jié)膜充血和輕度結(jié)膜炎表現(xiàn)，關(guān)節(jié)疼痛與發(fā)熱同時(shí)，患者全身的多個(gè)關(guān)節(jié)和脊椎出現(xiàn)十分劇烈的疼痛，且病情發(fā)展迅速，往往在數(shù)分鐘或數(shù)小時(shí)內(nèi)關(guān)節(jié)功能喪失，不能活動(dòng)，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)，可用于科研領(lǐng)域快速檢測(cè)基孔肯尼雅病毒。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。

2. 根據(jù)基孔肯尼雅病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

基孔肯尼雅病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成份	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	基孔肯尼雅病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	基孔肯尼雅病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1mL，綠蓋）
試劑七	使用手冊(cè)	1 份）

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分分開(kāi)放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假?yáng)性。

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋作為制備的陽(yáng)性對(duì)照；用水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品	陽(yáng)性對(duì)照	陰性對(duì)照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
基孔肯尼雅病毒 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
基孔肯尼雅病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過(guò)程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 min
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)）	95℃	30 sec
	57℃	30 sec
	72℃	15 sec
延伸	72℃	7 min

5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽(yáng)性對(duì)照有 122bp 預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)性，如果無(wú)則為陰性。