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上海信裕生物科技有限公司
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當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次破傷風梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑

破傷風梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑

參   考   價: 2490 2290

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價以合同協議為準

產品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質生產商

所  在  地上海

更新時間:2020-07-29 15:41:41瀏覽次數:472次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0217 應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。
破傷風梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據其理化性質分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經組織。

破傷風梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑

Clostridium tetani

產品及特點

破傷風梭狀芽孢桿菌(Clostridium tetani)是引起破傷風的病原菌,大量存在于 人和動物腸道中,由糞便污染土壤后經傷口感染引起疾病。本菌繁殖體抵抗力與其他 細菌相似,但其芽孢抵抗力強大。在土壤中可存活數十年,能耐煮沸 40-50 min。對 青霉素敏感,磺胺類有抑菌作用。本公司開發(fā)破傷風梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量 PCR 試劑盒,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物根據破傷風梭狀芽孢桿菌專一區(qū)設計,特異性高。

3. 熒光定量 PCR 檢測,比常規(guī) PCR 更加靈敏。

4. 一管式閉管操作,降低了交叉污染。

5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。

6. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

破傷風梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑?規(guī)格及成分

 

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

破傷風梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 引物混 合液

100 μL(白蓋)

試劑四

破傷風梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL)

50μL(紅蓋)

試劑五 天凈沙核酸釋放劑試用裝 20 次(1mL,綠蓋))

試劑六

使用手冊

1 份

運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。

自備試劑   樣品 DNA。

使用方法 一、制備標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。 由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原, 本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提 供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備 陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9. 如果進行定量分析,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品。如果做定 性分析,則 6 個標準曲線樣品只選一個做(可以選 4 號,其余樣品不變)。 以下只介紹定量分析的反應設置。

10. 在標記管中按下表加入各成分:

成分

樣品管 N+2 個

PCR 陰性 對照管

標準曲線 樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各 10 μL

破傷風梭狀芽孢桿菌染料法 qPCR 引物 混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 個待測樣品 DNA 模板 

6 μL

 

 

 自備超純水  6 μL 

第 7 步所得 PCR 陽性對照 稀釋液(2-7 號)

 

 

各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 PCR(具體 PCR 參數可以根據儀器不同 而自行優(yōu)化)。

四、熒光定量 PCR 反應參數

過程

溫度

時間

預變性

95℃

5 min

 

PCR 反應

(40 個循環(huán)

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 SYBR 通道的熒 光信號)

 

五、數據處理

12. 設定 60℃-96℃范圍的熔解曲線分析,排除假陽性。

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 32。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 32 則為陰性,如果小 于或等于 30 則為陽性。如果在 30-32 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 32 則為陰性,如果小于 30,則為陽性。

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