牛腎盂腎炎棒桿菌PCR試劑盒

Corynebacterium renale

產(chǎn)品及特點

腎棒狀桿菌(Corynebacterium renale)革蘭氏染色陽性，為球桿狀或棍棒 狀，呈單在、成叢或柵欄樣排列。細菌性腎盂腎炎由腎棒狀桿菌引起，主要發(fā) 生于母牛，公牛少見，馬和綿羊偶可發(fā)生。本病為尿源性感染，因此病原菌經(jīng) 尿道生殖道口感染后，先引起尿道炎、膀胱炎，然后再逆行導致 腎盂腎炎。由于腎組織損傷與尿液滯留，終病畜可因尿毒癥而死亡。病牛主 要表現(xiàn)發(fā)熱，食欲不振，尿頻，尿少，尿因混有黏液、膿液、大量蛋白質(zhì)、膿 細胞和白細胞、脫落的上皮細胞等而渾濁帶血色。尿液涂片或細菌培養(yǎng)可發(fā)現(xiàn) 病原菌。嚴重病例常發(fā)生尿毒癥。因此牛腎盂腎炎棒桿菌檢測具有重要的意義。 本試劑盒根據(jù) PCR 原理開發(fā)，它具有下列特點：：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增牛腎盂腎炎棒桿菌。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

牛腎盂腎炎棒桿菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一 個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設置 PCR 反應：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。