隱孢子蟲通用PCR試劑盒

Cryptosporidium spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

隱孢子蟲(Cryptosporidium spp.)為體積微小的球蟲類寄生蟲。廣泛存在 多種脊椎動(dòng)物體內(nèi)，寄生于人和大多數(shù)哺乳動(dòng)物的主要為微小隱孢子蟲，由微 小隱孢子蟲引起的疾病稱隱孢子蟲病，是一種以腹瀉為主要臨床表現(xiàn)的人畜共 患性原蟲病。病程可遷延數(shù)月至 1 年。病人常并發(fā)腸外器官隱孢子蟲病，如呼 吸道和膽道感染，使得病情更為嚴(yán)重復(fù)雜。隱孢子蟲感染常為 AIDS 病人并發(fā) 腹瀉而死亡的原因。因此快速準(zhǔn)確診斷隱孢子蟲具有重要意義。為此本公司基 于 PCR 原理開發(fā)了本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供寄生蟲 DNA 模板。

2. 根據(jù)隱孢子蟲保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與其他微生物無交叉反應(yīng)

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

隱孢子蟲通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。  

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一 個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 芽孢桿菌通用 PCR 陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。