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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0255	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

鴨坦布蘇病毒RT-PCR試劑盒

Duck Tambusu Virus（TMUV）

產(chǎn)品及特點(diǎn)

鴨坦布蘇病毒(Duck Tambusu Virus，TMUV)是一種 RNA 病毒，會(huì)引起一種以鴨出血性卵巢炎為主要病變特點(diǎn)的新發(fā)、急性、烈性傳染病，病鴨表現(xiàn)為采食減少，產(chǎn)蛋率迅速下降，種蛋受精率降低 10%左右，體溫升高，排綠色稀糞，后期神經(jīng)癥狀明顯，表現(xiàn)癱瘓、翻個(gè)，公鴨睪丸出血、萎縮，精子質(zhì)量下降、受精率低，給我國養(yǎng)鴨業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此鴨坦布蘇病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品根據(jù) PCR 原理開發(fā)，可用于科研領(lǐng) 域快速檢測(cè)鴨坦布蘇病毒。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。

2. 根據(jù)鴨坦布蘇病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

鴨坦布蘇病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成份	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份）

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對(duì)照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假陽性?nbsp;

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對(duì)照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對(duì)照；用水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品	陽性對(duì)照	陰性對(duì)照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 陽性對(duì)照的 100 倍稀釋液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 min
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對(duì)照無擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對(duì)照有 122bp 預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。