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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0281	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

乙型腦炎（乙腦）病毒RT-PCR試劑盒

Epidemic Encephalitis B

產(chǎn)品及特點(diǎn)

乙型腦炎病毒(Epidemic Encephalitis B)是一種 RNA 病毒，也是流行性乙型腦炎的病原體，在低溫條件下，該病毒能自下而上較長時間，在動物、雞胚及組織培養(yǎng)細(xì)胞中均能增殖。幼豬是乙腦病毒的主要傳染源和中間宿主，蚊子是乙腦病毒的傳播媒介。當(dāng)人受帶病毒的蚊子叮咬后，乙腦病毒進(jìn)入人體，在血管內(nèi) 皮細(xì)胞、淋巴結(jié)、肝、脾等吞噬細(xì)胞內(nèi)增殖，并血液循環(huán)到達(dá)腦部而引起炎癥。本產(chǎn)品根據(jù) PCR 原理開發(fā)，可用于科研領(lǐng)域快速檢測乙型腦炎（乙腦）病毒。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)乙型腦炎（乙腦）病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

乙型腦炎（乙腦）病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成份	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	乙型腦炎（乙腦）病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	乙型腦炎（乙腦）病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 拷貝/μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	天凈沙核酸釋放劑（試用裝）	20 次（1mL，綠蓋）
試劑七	使用手冊	1 份）

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假陽性?nbsp;

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照；用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品	陽性對照	陰性對照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
乙型腦炎（乙腦）病毒 RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2 個制備的 RNA 樣品	各12.5 μL
超純水		12.5 μL
乙型腦炎（乙腦）病毒 RT-PCR 陽性對照的 100 倍稀釋液	L		12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 min
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
延伸	72℃	7 min

5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果。如果陰性對照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對照有 122bp 預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。