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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次馬動脈炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

馬動脈炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

參   考   價: 2990 2790

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-07-31 15:11:13瀏覽次數(shù):429次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0287 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
馬動脈炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

馬動脈炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

Equine Arteritis Virus(EAV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

馬動脈炎病毒(Equine Arteritis Virus,EAV)是一種 RNA 病毒,病馬出現(xiàn) 以淋巴細(xì)胞減少為特征的白細(xì)胞減少癥,臨診病期大約 14 天,表現(xiàn)厭食、精神沉 郁、四肢嚴(yán)重水腫,步伐僵直,眼、鼻分泌物增加,面部、頸部、臀部形成皮膚 疹塊,因此馬動脈炎病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本 產(chǎn)品基于 PCR 原理開發(fā)。它具有下列特點(diǎn):

1.一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對照。
2.根據(jù)馬動脈炎病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng)。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。

馬動脈炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號

成  份

規(guī)格

試劑一

2×qRT-PCR 緩沖液

500 μL(棕色管)

試劑二

10×qRT-PCR酶混合液

100 μL(紅蓋)

試劑三

 ROX染料I,50×

20 μL(棕色管)

試劑四

ROX染料II,50×

20 μL(棕色管)

試劑五

熒光PCR模板稀釋液

1mL(亮黃蓋)

試劑六

馬動脈炎病毒 qRT-PCR引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑七

馬動脈炎病毒 qRT-PCR陽性對照

(1×10E8拷貝/μL

50 μL(黃蓋)

試劑八

天凈沙核酸釋放劑試用裝

20次(1mL,綠蓋)

試劑九

使用手冊

1份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個月。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨(dú)放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DNA段作為陽性對照。

自備試劑 樣品RNA

使用方法 一、稀釋陽性對照(以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原。
1.標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
2.在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(本試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
3.換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
4.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品RNA的制備
5.如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第4號(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。
6.用自選方法純化N+2個樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置RT-PCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
7.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號陽性對照稀釋液做模板)。下面只描述定量分析的步驟,定性分析只是把6個標(biāo)曲反應(yīng)縮減成1個,其余不變。
8.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子后后加): 

成分

N+2制備所得樣品

qRT-PCR 陰性對照

qRT-PCR 陽性 對照(2-7 管)?

2×qRT-PCR 緩沖液

10μL

10μL

各10μL

馬動脈炎病毒染料法 qRT-PCR

引物混合物

2μL

2μL

2μL

50×ROX (見注)

0.4μL

0.4μL

各0.4μL

 N+2 個 RNA 模板

5.6μL

不加

不加

6 個陽性對照稀釋液

不加

不加

5.6μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管

10×qRT-PCR

酶混合液

2μL

2μL

2μL

9.上機(jī)后按下面參數(shù)進(jìn)行RT-PCR(參數(shù)可能會因儀器不同而需優(yōu)化)。

過程

溫度

時間

RT逆轉(zhuǎn)錄

50℃

15-30分鐘

預(yù)變性

95℃

5 min

qRT-PCR 反應(yīng) (40 個循環(huán))

95℃

15 sec

58℃

1 min(采集 FAM 通道的熒光信號)

儀器預(yù)設(shè)程序進(jìn)行溶解曲線分析

四、數(shù)據(jù)處理

10. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值 為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

11. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于 或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于 或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等 于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大 于或等于 

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