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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號	XY-0365	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

單純皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒

Herpes Simplex Virus(HSV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

單純皰疹病毒（Herpes Simple Viruses， HSV）屬于皰疹病毒科 a 病毒亞科，為雙股 DNA 病毒，皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛，可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。對人的感染通過人與人接觸傳染。根據(jù)抗原性的差別目前把 HSV 分為 1 型和 2 型。1 型主要由口唇病灶獲得，2 型可從生殖器病灶分離到。從發(fā)生后四個(gè)月到數(shù)年被感染的人數(shù) 可達(dá)人口總數(shù)的 50-90%，是易感染人的一種病毒。因此對 HSV-1 的快速診斷具有重要的意義。本產(chǎn)品就是根據(jù) HSV-1 保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。本試劑盒具有下列特點(diǎn)：

1. 根據(jù) HSV-1 的 gD 基因設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。

2. 靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

3. 即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

單純皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號	成分	規(guī)格
試劑一	2×PCR MagicMix	1 mL（棕色，裝 A 袋）
試劑二	超純水	1 mL（紅蓋，裝 A 袋）
試劑三	引物 14-64110F	1 OD（本色，裝 B 袋）
試劑四	引物 14-64110R	1 OD（本色，裝 B 袋））
試劑五	HSV-1 陽性對照 (1×10E8 copy/μL)	50 μL（裝 C 袋）
試劑六	DNA 病毒裂解液（試用裝）	15 次（9 mL）
試劑七	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、C 袋的陽性對照分開放置)，有效期一年。

自備試劑 DNA 模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)原蟲 DNA 提取試劑盒兼容。本公司的柱式糞便 DNA 提取試劑盒也可以用于隱孢子蟲 DNA 提取。

二、引物的制備（在樣品制備室進(jìn)行）

2. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物試管上的標(biāo)簽），使得兩條引物的濃度均為 10μM（10pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，標(biāo)注為引物混合物，放冰上待用。220μL 足夠 100 次 qPCR 反應(yīng)。

三、稀釋陽性對照

（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 150bp 的 DNA 段作為陽性對照。

3. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。

5. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

8. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得 1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

9. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后后加）：

成分	樣品	陰性對照	陽性對照（2-7 管）
2×qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各 10 μL
引物混合物	2 μL	2 μL	各 2 μL
自備 10×ROX (見注)	2 μL	2 μL	2 μL
待測樣品 DNA 模板	1-5 μL
陽性對照（2-7 號）			各 5μL（2 號樣到 2 號管，3 號樣到 3 號管…）
補(bǔ)水到	20 μL	20 μL	20 μL

11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）。

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	1 分鐘
PCR 反應(yīng) （45 個(gè)循環(huán)））	95℃	15 秒
PCR 反應(yīng) （45 個(gè)循環(huán)））	60℃	60 秒

12. 數(shù)據(jù)采集具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。一般在復(fù)性步驟采集熒光數(shù)據(jù)。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí)，大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時(shí)的大吸收光譜在 500 nm，大發(fā)射光譜在 530 nm。

四、數(shù)據(jù)處理

13. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。