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上海信裕生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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組織胞漿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

參   考   價(jià): 2490 2290

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-08-03 13:42:46瀏覽次數(shù):475次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號(hào) XY-0376 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
組織胞漿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類(lèi)皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類(lèi)和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

組織胞漿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

Histoplasm spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

組織胞漿菌(Histoplasm spp)會(huì)引起組織胞漿菌病,是一種在世界范圍內(nèi)廣 泛流行的傳染病,尤其是以嬰幼兒和老年人多見(jiàn),男性發(fā)病率高于女性,臨床表 現(xiàn)有原發(fā)性肺部感染、播散性感染等,原發(fā)性肺部感染常表現(xiàn)為發(fā)熱、頭疼、全 身不適和干咳,嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)低氧血癥和呼吸衰竭,播散性感染常有發(fā)熱、體重 下降、全身不適、肝脾腫大等癥狀,罕有伴發(fā)肺病變等癥狀,該細(xì)菌的感染對(duì)人 體健康造成嚴(yán)重?fù)p害,因此快速檢測(cè)組織胞漿菌通用具有重要意義。熒光定量 PCR 是檢測(cè)傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為 基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)組織胞漿菌通用的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供 DNA 模板。

2. 特異性高,引物是根據(jù)組織胞漿菌通用高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不擴(kuò)增其他微生物。

3. 引物和擴(kuò)增體系經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性比常規(guī) PCR 高 100 倍。

4. 提供無(wú)傳染性的 PCR 陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

5. 一管式操作,熒光 PCR 檢測(cè),不容易產(chǎn)生環(huán)境污染。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。

組織胞漿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

2×qPCR MagicMix

0.5 mL(棕色)   

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋) 

試劑三

組織胞漿菌通用 PCR 引物

100 μL白蓋) 

試劑四

組織胞漿菌通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照 (1×10E8 拷貝/μL) 

50 μL(黃蓋)

 

試劑 天凈沙核酸釋放劑試用裝 20 次(1mL,綠蓋)

試劑

使用手冊(cè)

1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。

3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提 供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備 陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做樣品),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品。如果做定性檢測(cè),則不需要設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)曲線,只取 1×10E5 拷貝/μL 的 陽(yáng)性對(duì)照做 PCR 陽(yáng)性對(duì)照。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后后加): 

成分

樣品管 N+2 個(gè) 

PCR陰性對(duì)照

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管

2×qPCR MagicMix

10 μL 

10 μL 

10 μL 

組織胞漿菌通用 PCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 自備 10×ROX (見(jiàn)注)  2 μL 2 μL 各 2 μL

待測(cè)樣品 DNA 模板 

6 μL 

 

-

 自備超純水  6 μL  

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣 品稀釋液(2-7 號(hào)) 

-

 

各 6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) 管…) 

11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化)。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù) 

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95

3 min

PCR 反應(yīng) (40 個(gè)循環(huán))

95

20 s

60℃

30s(采集 SYBR 通

 

五、數(shù)據(jù)處理

12. 設(shè)定 60℃-96℃范圍的融解曲線分析,排除假陽(yáng)性。

13. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

14. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大 于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小 于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。 

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