HIV-1前病毒PCR試劑盒

HIV-1 Provirus HIV-1

產(chǎn)品及特點

人類免疫缺陷病毒１型（HIV-１）患者血漿中病毒 RNA 水平一直以來是評判抗病 毒治療效果或預(yù)測疾病進(jìn)展的重要指標(biāo)。但是，經(jīng)抗病毒治療后血漿 HIV-１RNA 已達(dá) 到基線水平感染者的血液、精液或淋巴結(jié)中仍可以檢測到 HIV-１原病毒 DNA 的存在， 構(gòu)成病毒儲藏庫，對清除 HIV-１病毒構(gòu)成嚴(yán)重阻礙。所以在病毒載量已經(jīng)檢測不到的 情況下，HIV-１原病毒 DNA 水平可以作為除 CD4+Ｔ細(xì)胞計數(shù)和病毒載量之外的另一 標(biāo)志物。本產(chǎn)品就是針對此需求而建立的一種檢測 HIV-１原病毒 DNA 的 PCR 檢測方 法，該種方法還可用于 HIV-１病毒儲藏庫中 HIV-１原病毒 DNA 的檢測。本試劑盒具 有下列特點： 

1. 根據(jù) HIV-1 LTR 基因設(shè)計的針對 HIV-1 原病毒的 PCR 引物，專一性強(qiáng)。

2. 即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。

3. 試劑盒有陽性對照，別于區(qū)分真假陽性。

4. 本試劑盒足夠 50 次 40μL 反應(yīng)體系的常規(guī) PCR。

5. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。 

HIV-1前病毒PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下列 PCR 參數(shù)進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實 驗無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。