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供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0383 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
人類內源性逆轉錄病毒RT-PCR試劑盒
Human Endogenous Retroviruses(HERV)
產品及特點
人類內源性逆轉錄病毒(HERV)是幾百萬年前整合到人類基因組中的逆轉錄 病毒的殘余物,約占了整個基因組的 8%。大部分 HERV 元件在進化過程中由于 突變、缺失等的積累,已沒有編碼能力。但仍有少數(shù)由于正性選擇的壓力,完整 的開放閱讀框被保留了下來。它們在一些特定的組織或分化發(fā)育的特定階段表 面,可能具有重要的生理意義。本產品根據 PCR 原理開發(fā),可用于科研領域快 速檢測人類內源性逆轉錄病毒。它具有下列特點:
1. 一站式,用于不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據人類內源性逆轉錄病毒的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術,RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成,不需要中間 轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研,不能用于臨床。
人類內源性逆轉錄病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成 份 | 規(guī)格 |
試劑一 | 5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(橘黃蓋) |
試劑二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(紅蓋) |
試劑三 | 超純水 | 1 mL(亮黃蓋) |
試劑四 | 人類內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑五 | 人類內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
試劑六 | 天凈沙核酸釋放劑(試用裝) | 20 次(1mL,綠蓋) |
試劑七 | 使用手冊 | 1 份) |
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置,因為其容易污染其他成分,造成假陽性。
自備試劑 樣品 RNA
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性 對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照;用水作為制備的陰性對照。 制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。
二、設置 RT-PCR 反應(20μL 體系)
3. 如果有 N+2 個樣品,則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照,另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 | 樣品 | 陽性對照 | 陰性對照 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
人類內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 引物 混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2 個制備的 RNA 樣品 | 各12.5 μL |
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超純水 |
| 12.5 μL |
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人類內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 陽性 對照的 10000 倍稀釋液 | L |
| 12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上機進行 RT-PCR,RT-PCR 反應參數(shù)為:
過程 | 溫度 | 時間 |
逆轉錄 | 42℃ | 30 min |
預變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應 (35 個循環(huán)) | 95℃ | 30 sec |
53℃ | 30 sec | |
72℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物, 則說明實驗失敗,需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、 陽性對照有 122bp 預期的擴增產物的情況下,才有必要分析樣品的實驗結果, 如果有擴增產物則為陽性,如果無則為陰性。
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