豬圓環(huán)病毒1型PCR試劑盒

Porcine Circovirus 1 (PCV-1)

產(chǎn)品及特點

豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus，PCV）在分類學上屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病 毒屬，為已知的小的動物病毒之一。病毒粒子直徑 14-17nm，呈 20 面體對 稱結(jié)構(gòu)，無囊膜，含有共價閉合的單股環(huán)狀負鏈 DNA，基因組大小約為 1.76kb。 PCV 對外界理化因子的抵抗力相當強。PCV-1 是在 1974 年由德國學者 Tischer 從多株連續(xù)傳代的 PK-15 細胞中先發(fā)現(xiàn)，無致病性但能產(chǎn)生血清抗 體，并且在調(diào)查的豬群中普遍存在。本產(chǎn)品就是根據(jù)豬圓環(huán)病毒 1 型保守區(qū)設 計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增豬圓環(huán)病毒 1 型，，與其他病原沒有交叉反 應。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

豬圓環(huán)病毒1型PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設置 PCR 反應（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設置 PCR 反應：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。