莫氏立克次體PCR試劑盒

Rickettsia mooseri

產(chǎn)品及特點

地方性斑疹傷寒亦稱蚤型或鼠型斑疹傷寒，由莫氏立克次體以鼠蚤為媒介而 引起的急性傳染病。莫氏立克次體接種雄性豚鼠腹腔后，豚鼠除發(fā)熱外，高度水腫，稱之為豚鼠現(xiàn)象。莫氏立克次體在睪丸鞘膜的漿細胞中繁殖甚 多，其鞘膜滲出液涂片可查見大量立克次體。莫氏立克次體可引起大白鼠發(fā)熱 或致死，并在其腦內(nèi)存活數(shù)月，故可用之保存菌種或傳代；接種于小白鼠腹腔 內(nèi)可引起致死性腹膜炎及敗血癥。因此對莫氏立克次體進行快速靈敏的診斷具 有重要的意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品，它具有下列特 點：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增莫氏立克次體，但跟其他微生物無 交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

莫氏立克次體PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。