羌蟲病立克次氏體PCR試劑盒

Rickettsia tsutsugamushi

產(chǎn)品及特點(diǎn)

羌蟲病立克次氏體(Rickettsia tsutsugamushi)會(huì)引起羌蟲病，或稱紅蟲病。其致病主要為被帶有恙蟲病立克次體的恙蟲幼蟲叮咬而感染的急性熱病。一般而言老鼠是恙蟲常見的宿主。恙蟲病潛伏期約9至12天，主要臨床癥狀為：在螯口處形成*的無痛性洞穿式潰瘍性焦痂；發(fā)高燒，局部淋巴腺發(fā)炎腫大；自發(fā)病日起4-5天開始﹐軀干先出現(xiàn)紅疹繼而擴(kuò)至四肢及臉﹐約第9-10病日間會(huì)消退；常伴有頭痛、出汗、結(jié)膜充血、昏迷、末期心跳衰竭、休克等癥狀，因此快速檢測(cè)羌蟲病立克次氏體具有重要意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增羌蟲病立克次氏體。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

羌蟲病立克次氏體PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽 性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 陽性對(duì)照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。