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當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次羅斯河病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

羅斯河病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

參   考   價: 2990 2790

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-08-11 17:21:33瀏覽次數(shù):476次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0639 應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。
羅斯河病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

羅斯河病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

Ross River Virus(RRV)

產(chǎn)品及特點

羅斯河病毒(Ross River Virus,RRV)是一種RNA病毒,會引起羅斯河熱病,是一種南太平洋的地方病,在澳洲、巴布亞新幾內(nèi)亞和其他海島流行。由蚊子傳播,是不致命,但是致衰弱的熱帶疾病,以前被命名“流行性多關節(jié)炎”。懷疑病毒是地方性的,在當?shù)匕拇罄麃喌娜撕透鞣N各樣的哺乳動物中可被找到,因此羅斯河病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā)。它具有下列特點:

1.一站式,用于不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2.根據(jù)羅斯河病毒的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達到至少1000拷貝/反應。
4.使用一管式qRT-PCR技術,RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。

羅斯河病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號

成  份

規(guī)格

試劑一

2×qRT-PCR 緩沖液

500 μL(棕色管)

試劑二

10×qRT-PCR酶混合液

100 μL(紅蓋)

試劑三

 ROX染料I

50 μL(棕色管)

試劑四

ROX染料II

50 μL(棕色管)

試劑五

熒光PCR模板稀釋液

1mL(亮黃蓋)

試劑六

羅斯河病毒RT-PCR引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑七

羅斯河病毒RT-PCR陽性對照

(1×10E8拷貝/μL

50 μL(黃蓋)

試劑八

天凈沙核酸釋放劑試用裝

20次(1mL,綠蓋)

試劑九

使用手冊

1份

運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存(陽性對照分開放置),有效期一年。 

自備試劑   樣品 DNA。

使用方法 一、稀釋陽性對照(以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原。
1.標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
2.在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(本試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
3.換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
4.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品RNA的制備
5.如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第4號(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。
6.用自選方法純化N+2個樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
三、設置RT-PCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)
7.如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復,則標記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號陽性對照稀釋液做模板)。下面只描述定量分析的步驟,定性分析只是把6個標曲反應縮減成1個,其余不變。
在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子后后加):

成分

N+2制備所得樣品

RT-PCR陰性對照

RT-PCR陽性

對照(2-7管)

2×qRT-PCR 緩沖液

10μL

10μL

各10μL

 

羅斯河病毒 RT-PCR 引物混合物 

2μL

2μL

2μL

50×ROX (見注)

0.4μL

0.4μL

各0.4μL

 樣品制備所得RNA模板(來于8

5.6μL

不加

不加

稀釋所得6個陽性對照(來于第6步)

不加

不加

5.6μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管

10×qRT-PCR

酶混合液

2μL

2μL

2μL

9.上機后按下面參數(shù)進行RT-PCR(參數(shù)可能會因儀器不同而需優(yōu)化)。

過程

溫度

時間

RT逆轉錄

50℃

15-30分鐘

預變性

94℃

2分鐘

RT - PCR反應

30個循環(huán))

95℃

15 秒

60

15 秒(采集FAM通道的熒光信號

72

15 秒

儀器預設程序進行溶解曲線分析

四、數(shù)據(jù)處理
10.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。
11.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復一次。重復實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。

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