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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次羅斯肉瘤病毒RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品型號(hào)50次
品 牌其他品牌
廠(chǎng)商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時(shí)間:2020-08-12 13:15:57瀏覽次數(shù):434次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | 0641 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。 |
羅斯肉瘤病毒RT-PCR試劑盒
Rous′ Sarcoma Virus(RSV)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
羅斯肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus,RSV)又稱(chēng) Rous 肉瘤病毒或勞氏肉瘤 病毒,是由美國(guó)病理學(xué)家勞斯(F. P. Rous)在 1910 年發(fā)現(xiàn)。把禽類(lèi)的惡性肉瘤 的組織液經(jīng)濾筒濾出液接種于另外一些正常雞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些正常雞也生長(zhǎng)出具 有與病禽肉瘤一樣的惡性腫瘤,并從濾液中分離出能引起肉瘤的因子,繼而又把 該因子稱(chēng)之為勞氏肉瘤病毒。它是屬于動(dòng)物病毒中的單鏈 RNA 病毒類(lèi)。目前主 要用于對(duì)癌和疫苗的研究上。本產(chǎn)品根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā),可用于科研領(lǐng)域快速 檢測(cè)羅斯肉瘤病毒。它具有下列特點(diǎn):
1. 一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對(duì)照。
2. 根據(jù)羅斯肉瘤病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
羅斯肉瘤病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號(hào) | 成 份 | 規(guī)格 |
試劑一 | 5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(橘黃蓋) |
試劑二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(紅蓋) |
試劑三 | 超純水 | 1 mL(亮黃蓋) |
試劑四 | 羅斯肉瘤病毒RT-PCR 引物 混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑五 | 羅斯肉瘤病毒 RT-PCR 陽(yáng)性 對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
試劑六 | 天凈沙核酸釋放劑(試用裝) | 20 次(1mL,綠蓋) |
試劑七 | 使用手冊(cè) | 1 份) |
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分 分開(kāi)放置,因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?,造成假?yáng)性。
自備試劑 樣品 RNA
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
1. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性 對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋作為制備的陽(yáng)性對(duì)照;用水作為制備的陰性對(duì)照。 制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。
二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系)
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照,另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 | 樣品 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
羅斯肉瘤病毒 RT-PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品 | 各12.5 μL |
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超純水 |
| 12.5 μL |
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羅斯肉瘤病毒RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照 的 100 倍稀釋液 | L |
| 12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR,RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 42℃ | 30 分鐘 |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 分鐘 |
PCR 反應(yīng) (35 個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15 秒 |
49℃ | 15 秒 | |
延伸 | 72℃ | 1 分鐘 |
5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物, 則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗,需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物、 陽(yáng)性對(duì)照有 122bp 預(yù)期的擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下,才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 如果有擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)性,如果無(wú)則為陰性。
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