志賀氏菌屬通用PCR試劑盒

Shigella spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

志賀氏菌屬(Shigella Castellani)是一類革蘭陰性短小桿菌，是人類細(xì)菌性 痢疾常見(jiàn)的病原菌，主要流行于發(fā)展中國(guó)家，通稱痢疾桿菌，耐寒，能 在普通瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò) 24 小時(shí)生長(zhǎng)，形成直徑達(dá) 2mm 大小、半透明的 光滑型菌落。在腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基上形成無(wú)色菌落。大小為 0.5~0.7× 2~3μm，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，多數(shù)有菌毛。革蘭氏陰性桿菌，是人和 靈長(zhǎng)類動(dòng)物的腸道致病菌，引起細(xì)菌性痢疾。。因此快速靈敏檢測(cè)志賀氏菌 屬具有重要的意義，本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的志賀氏菌屬檢測(cè)的通用試 劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)志賀氏菌屬，與其他病原沒(méi)有交叉反 應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

志賀氏菌屬通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng) 性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提 供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。陽(yáng)性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排 除 PCR 抑制劑的感染。