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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次無乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品型號50次
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海
更新時間:2020-08-13 14:20:29瀏覽次數(shù):503次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號 | XY-0689 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。 |
無乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒
Streptococcus agalactiae
產(chǎn)品及特點
無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)是一種革蘭氏陽性鏈球菌,因 先從患乳腺炎的牛中分離而得名。隨后在各國孕產(chǎn)婦和新生兒中分離到,可引起 新生兒早發(fā)和晚發(fā)型感染,無乳鏈球菌也被發(fā)現(xiàn)于各種畜牧及水產(chǎn)魚類的流行病 中,因此受到廣泛關(guān)注。該菌能導(dǎo)致動物體產(chǎn)生敗血癥和腦膜炎,且具有較高的 致死率。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測無乳鏈 球菌的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)無乳鏈球菌高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病原 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
無乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
編號 | 成分 | 規(guī)格 |
試劑一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500 μL(本色蓋) |
試劑二 | 熒光 PCR 模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
試劑三 | 無乳鏈球菌探針法 qPCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
試劑四 | 無乳鏈球菌 qPCR 探針 | 50 μL(棕色管) |
試劑五 | 無乳鏈球菌探針法 qPCR 陽性對照 (1×10E8 拷 貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
試劑六 | 使用手冊 | 1 份 |
運輸及保存 低溫運輸、-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭, 下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個樣品,好設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性 對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼 容。
三、Probe qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個 用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用 水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后后加):
成分 | 樣品管 N+2個 | PCR陰性對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7管) |
2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
無乳鏈球菌qPCR探針 | 1 μL | 1 μL | 各1 μL |
無乳鏈球菌探針法qPCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
N+2個待測DNA模板 | 7 μL | 不加 | 不加 |
超純水 | 不加 | 7 μL | 不加 |
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(2-7號) | 不加 | 不加 | 各7 μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管…) |
11.蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行PCR:
過程 | 溫度 | 時間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 3 min |
PCR反應(yīng) (40個循環(huán)) | 95℃ | 15sec |
60℃ | 1 min(采集 FAM 通道的熒 光信號) |
四、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值 為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。若重復(fù)結(jié)果 Ct 值小于 40,擴增曲線有明顯起峰,該樣本判斷為陽性,否則為陰性。
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