弧菌通用PCR試劑盒

Vibrio spp.

產(chǎn)品及特點(diǎn)

弧菌（Vibrio spp.）是菌體短小，彎曲成弧形，尾部帶一鞭毛的革蘭氏陰性菌。弧菌屬廣泛分布于河口、海灣、近岸海域的海水和海洋動物體內(nèi)。該菌引起的食物中毒經(jīng)烹飪不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品或鹽腌制品所傳播。常見的為海蟄、海魚、海蝦及各種貝類，因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后，也可發(fā)生食物中毒。該菌常年均可發(fā)生，可從自限性腹瀉至中度霍亂樣病癥，有腹痛、腹瀉、嘔吐和低熱，糞便多為水樣，少數(shù)為血水樣，恢復(fù)較快，病后免疫力不強(qiáng)，可重復(fù)感染，該菌還可引起淺表創(chuàng)傷感染、敗血癥等，給人體健康帶來嚴(yán)重?fù)p害，因此弧菌檢測具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

1.即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌DNA模板。
2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增弧菌。

3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5.本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。
6.本產(chǎn)品只能用于科研。

弧菌通用PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽 性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性 對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分： 

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。