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上海信裕生物科技有限公司
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當前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

參   考   價: 2990

訂  貨  量: ≥1  件

具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2020-08-20 11:16:46瀏覽次數(shù):398次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號 XY-0834 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴增效率、更高的擴增靈敏度、更高的擴增特異性。
胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板,引物經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高,提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品,特異性高,引物是根據(jù)牛源性成分單重?zé)晒飧叨缺J氐?VP1 區(qū)設(shè)計,PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)品簡介:

熒光定量 PCR 是檢測傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測胡桃源性成分的試劑盒。

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據(jù)胡桃源性成分高度保守的 VP1 區(qū)設(shè)計。

5. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

產(chǎn)品名稱

方法

規(guī)格

價格

胡桃源性成分LAMP試劑盒

LAMP

50次

2490元

胡桃源性成分PCR試劑盒

PCR

50次

1490元

胡桃源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法

50次

2490元

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

探針法

50次

2990

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒包裝規(guī)格及成分:

編號

成分

規(guī)格

試劑一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

試劑二

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑三

胡桃源性成分PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑四

胡桃源性成分PCR 陽性對照 

(1×10E8 拷貝/μL)

50 μL(紅蓋)

試劑五

DNA 病毒裂解液試用裝

15 次(9 mL)

試劑六

使用手冊

1 份

運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

自備試劑:DNA 模板

 

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法:

一.稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。

3.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二.樣品 DNA 的制備

7.如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 上步制備的標準曲線樣品的第 4 號(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL 相當于 1 萬拷貝)或第 5 號(濃度為 1×10E5 拷貝/μL,10μL 相當于 10 萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要 200μL 樣品,則 PC 和 NC 的體積也必須是 200μL。

8.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。?

過程

溫度

時間

預(yù)變性

94℃

5 min

 

PCR 反應(yīng)

(35 個循環(huán))

94℃

0.5 min

50℃

0.5 min(采集 SYBR 通道的 熒光信號)

72℃

0.5 min

后延伸

72℃

10 min

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進行)

9.如果只做 1 次重復(fù),則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品。如果做 2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

10.在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):

成分

樣品管 N+2 個

PCR 陰性 對照管

標準曲線 樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix (棕色管)

10 μL

10 μL

各 10 μL

胡桃源性成分PCR 引 物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

各 2 μL

自備 10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

待測樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

第 7 步所得標準曲線樣 品稀釋液(2-7 號)

不加

不加

各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號樣到 3 號管…)

11.蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同 而自行優(yōu)化)。

四、熒光定量 PCR 反應(yīng)參數(shù)

五、數(shù)據(jù)處理
12.以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

六、電泳檢測 
13.如果有必要電泳確認,可取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產(chǎn) 物的大小為 400 bp。

胡桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒熒光定量PCR結(jié)果分析:
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段、熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級增加,PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,無法計算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號指數(shù)擴增階段,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個重要的概念:擴增曲線、熒光閾值、CT值。

 

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