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技術(shù)文章

新型組織化學(xué)染色脫色法

閱讀:1045          發(fā)布時間:2020-9-30

 

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本文摘自和光純藥時報 Vol.87 No.4(2019年10月號),由麻布大學(xué)獸醫(yī)學(xué)部 解剖第二研究室 小澤秋沙執(zhí)筆撰寫。

 

本法是一種可使臨床檢查或研究中應(yīng)用廣泛的組織化學(xué)染色蘇木精-伊紅(HE)或Masson法(MT)染色的組織切片脫色,并可重新用于其他染色的方法。

迄今為止,每一種組織化學(xué)染色通常都需要使用至少一片組織切片,因此必須準備與組織化學(xué)染色方法相對應(yīng)數(shù)量的組織切片。然而,由于制備組織切片時的技術(shù)熟練度以及組織樣品狀態(tài)、大小等原因,有時很難備齊多個適合評價的組織切片。另外,在評價同一細胞時一般使用連續(xù)切片的方法,然而即使獲得了合適的連續(xù)切片,想要觀察的組織結(jié)構(gòu)和細胞內(nèi)結(jié)構(gòu),也可能不同時存在于兩個相鄰的組織切片上。

在這種情況下,重復(fù)利用已有觀察特征的細胞或結(jié)構(gòu)的組織切片就會十分有用。HE染色可獲取組織大致特征,因此是*染色的代表染色法之一,如果可以對HE染色后的目標結(jié)構(gòu)的組織切片進行重新染色,便可以提高臨床檢查以及研究結(jié)果的準確性。

至今為止,組織切片脫色通常使用乙醇與鹽酸的混合溶液、含有草酸、高錳酸鉀的溶液。然而,這些脫色方法都會影響組織切片在脫色后的再染色效果。

實際上,在乙醇中加入鹽酸的溶液不能對蘇木精等染料充分脫色。而通過高錳酸鉀、草酸脫色則會對組織切片造成很大的損害,重新染色時組織結(jié)構(gòu)可能會因為切片剝離被破壞,從而限定了再染色的方法,也限制了組織切片的再利用。因此,學(xué)界期待開發(fā)一種幾乎不會損害組織切片,并且可以對多種染色法進行脫色后再染色的全新方法。

這次,F(xiàn)UJIFILM Wako開發(fā)的deColorizing Solution,可以對HE染色后確認了組織狀態(tài)(特定的結(jié)構(gòu)及細胞的存在)的切片脫色,再重新用于其他染色,從而能夠從同一組織切片中獲得更多信息。該方法的特點在于可以對原本難以脫色的蘇木精、鐵蘇木精進行脫色。

使用方法:首先將染色后密封的載玻片標本浸入二甲苯等有機溶劑中,直至蓋玻片自然剝落。請注意,在此過程中若是強行分離蓋玻片可能會破壞組織切片。

另外,若在組織切片上仍然殘留有封固劑的狀態(tài)下就進行下一步驟,水溶性色素在水合后不會脫落,會降低隨后使用deColorizing Solution進行脫色的效果,因此必須使用二甲苯等有機溶劑充分浸泡。必須注意的是,標本越舊,封固劑的固化越牢固,封固劑就越難去除。

其次,將組織切片依次用各種濃度的乙醇進行水合,后浸入蒸餾水中。在水合過程中,伊紅等水溶性色素基本脫色,組織切片上僅殘留染色的蘇木精。將殘留蘇木精染色的組織切片浸入按照使用濃度稀釋的deColorizing Solution 1中。脫色主要取決于組織切片染色后保存的時長,但蘇木精在室溫下于deColorizing Solution 1中浸漬1 h基本就能脫色。

鐵蘇木精脫色時需要在deColorizing Solution 1中浸漬1 h后使用蒸餾水清洗3次,然后浸漬于deColorizing Solution 2。通過光學(xué)顯微鏡確認脫色程度(染色殘留情況),確認不會影響下次染色后,浸漬于蒸餾水并清洗3次,這時可用于重新染色。

目前,在使用deColorizing Solution脫色后,可以使用的再染色方法已確認的有HE染色、PAS染色、MT染色和免疫組織化學(xué)染色。

圖1和圖2分別是小鼠海馬體以及肝臟在HE染色后使用deColorizing Solution按照上述步驟脫色后的圖片。如圖1A及圖2A所見,包括細胞核在內(nèi),被蘇木精染色的部分在圖1B及圖2B中大部分已被脫色。

 

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                                   圖1.  使用deColorizing Solution 1脫色HE 染色后的組織切片并重新染色

                                   A:HE染色的小鼠海馬體組織圖像

                                   B:使用deColorizing Solution 1脫色后與A相同位置的組織圖像

                                   C:脫色后使用抗Iba1抗體進行熒光免疫組織化學(xué)染色后與A和B相同位置的組織圖像

 

 

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                                   圖2. 使用deColorizing Solution 1脫色HE 染色后的組織切片并重新染色

                                   A:HE染色的小鼠肝臟組織圖像

                                   B:使用deColorizing Solution 1脫色后與A相同位置的組織圖像

                                   C:脫色后使用抗PCNA抗體進行免疫組織化學(xué)染色后與A和B相同位置的組織圖像

 

 

另外,圖3為小鼠肝臟以及腎臟在MT染色后使用deColorizing Solution 1和2脫色后的圖像。圖3A和C中包括細胞核在內(nèi),被鐵蘇木精染色的大部分在圖3B和D中均已*脫色。

 

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                                   圖3. 使用deColorizing Solution 1和2對MT 染色后的組織切片脫色

                                   A:MT染色后的小鼠肝臟組織圖像

                                   B:使用deColorizing Solution 1和2脫色后與A相同位置的組織圖像

                                   C:MT染色后的小鼠腎臟的組織圖像

                                   D:使用deColorizing Solution 1和2脫色后與C相同位置的組織圖像

 

 

圖1C為小鼠海馬體脫色后使用抗Iba1抗體(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)進行免疫組織化學(xué)染色的圖片,圖1A和B為同一位置的圖像。如圖可見,脫色后的海馬體切片仍然可以檢測出Iba1陽性小膠質(zhì)細胞突起。圖2C為小鼠肝臟脫色后使用抗PCNA抗體進行免疫組織化學(xué)染色的圖片。如圖可見,陽性PCNA主要在肝細胞的細胞核中表達。

另外,并未發(fā)現(xiàn)因脫色導(dǎo)致的組織切片破壞等損傷。

該方法的優(yōu)點在于,大量長期保存在大學(xué)、研究所、醫(yī)院等的*組織切片,在制備時沒有新型染色方法以及針對新型抗原的抗體,通過再染色等方法可以重新評價以獲取新的實驗信息。

目前,deColorizing Solution的應(yīng)用只適用于HE 染色和MT 染色后的脫色,但隨著該方法的應(yīng)用范圍拓展,脫色法在重復(fù)使用組織切片方面的實用性將進一步提高。

 

◆產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱規(guī)格包裝
043-34561deColorizing Solution 1病理研究用250 mL
046-34551deColorizing Solution 2病理研究用250 mL

 

欲了解deColorizing Solution的產(chǎn)品介紹及特點,請聯(lián)系客服。 

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