GenomONE ® 仙臺病毒包膜細(xì)胞融合試劑
GenomONE®-CF EX含有仙臺病毒包膜和緩沖液，可促使細(xì)胞融合。適用于貼壁或者懸浮狀態(tài)的任何細(xì)胞。僅僅需要30分鐘就可完成融合細(xì)胞及制造混合動力的操作。

GenomONE ^® -CF EX

GenomONE ^® 仙臺病毒包膜細(xì)胞融合試劑

 

 

 

　　GenomONE^®-CF EX含有仙臺病毒包膜和緩沖液，可促使細(xì)胞融合。適用于貼壁或者懸浮狀態(tài)的任何細(xì)胞。僅僅需要30分鐘就可完成融合細(xì)胞及制造混合動力的操作。

 

 

◆用途

 

●　腫瘤疫苗·癌癥免疫研究

●　癌細(xì)胞和樹突細(xì)胞融合等

●　再生醫(yī)療·細(xì)胞治療研究

●　臟器來源細(xì)胞和干細(xì)胞融合等

●　單克隆抗體的制備

●　抗原B細(xì)胞和髓過氧化物酶細(xì)胞融合

●　分生·分化·育種研究

●　對脫核未受精卵的核移植（核置換）

●　其他

●　PEG&電融合的使用介紹

 

 

◆HVJ Envelope（HVJ-E）：

 

 

　　HVJ包膜（HVJ-E）是*滅活和純化仙臺病毒（HVJ*），即只留下細(xì)胞膜融合能力的衣殼蛋白包膜。仙臺病毒的HN蛋白可與細(xì)胞膜外的唾液酸受體結(jié)合，通過F蛋白的作用，引起細(xì)胞膜融合。在HVJ-E中，仙臺病毒的基因組RNA已經(jīng)*失活，在人類和實驗動物體內(nèi)不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和設(shè)備，它可以安全地在普通的實驗室使用。

*HVJ：日本仙臺病毒

 

 

◆HVJ-E細(xì)胞融合原理

 

在低溫（0 - 8℃)條件下，每一個細(xì)胞與數(shù)百個以上的HVJ - E接觸，HVJ - E與細(xì)胞膜上的唾液酸受體結(jié)合，通過細(xì)胞表面吸附（步驟1），細(xì)胞通過HVJ-E相互連接（步驟2），形成細(xì)胞彼此聚集的狀態(tài)。當(dāng)該細(xì)胞/ HVJ-E的復(fù)合物加熱到37℃時，細(xì)胞膜干擾就會進(jìn)一步擴(kuò)大，細(xì)胞膜內(nèi)膜結(jié)構(gòu)也暫時改變。這種變化是短暫的，隨后會立即返回到正常結(jié)構(gòu)，但是在這個期間，細(xì)胞膜利用強(qiáng)疏水性結(jié)合力進(jìn)行相互融合（步驟3）。

 

步驟一	步驟二	步驟三

 

 

◆應(yīng)用方法

 

懸浮法	電鍍法

 

 

◆懸浮細(xì)胞融合案例

 

同種細(xì)胞融合

異種細(xì)胞融合

 

 

　　熒光標(biāo)記的紅（* 1）細(xì)胞和綠色熒光標(biāo)記（* 2）細(xì)胞（每1.0×10⁵個）在融合緩沖液50 μL混合后，加入HVJ-E冰敷5分鐘，隨后37℃下反應(yīng)15分鐘后，融合細(xì)胞（黃色）進(jìn)行了觀察。

 

 

◆黏著態(tài)和懸浮態(tài)細(xì)胞融合案例

 

在粘合狀態(tài)BHK-21（紅）和在浮動狀態(tài)（綠色）的P19細(xì)胞的融合

膠粘狀態(tài)的HeLa S3（紅）在浮動狀態(tài)（綠色）的P19細(xì)胞的融合

 

　　熒光標(biāo)記的（* 1）中的紅，附著的細(xì)胞在12孔平板，綠色熒光標(biāo)記（* 2）中，添加預(yù)先準(zhǔn)備的HVJ-E，來處理漂浮細(xì)胞1×10⁵個的懸浮液（融合緩沖污染），并在室溫下離心（1000轉(zhuǎn)），每個板5分鐘。隨后孵育37℃15分鐘后，更換增殖用的培養(yǎng)基繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)。觀察3個小時后的融合細(xì)胞（黃色）。

 

 

◆和PEG法的比較

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　　紅色熒光標(biāo)志(* 1）的ratMSC（骨髓由來老鼠間葉系細(xì)胞）和綠色熒光標(biāo)識的老鼠原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞2×10⁵個融合緩沖液50　μL中混合后，添加HVJ – E，冰浴5分鐘，然后37℃孵育反應(yīng)15分鐘，觀察融合細(xì)胞（黃色）。1 - 2日培養(yǎng)后，觀察到粘著的融合細(xì)胞。在PEG法中融合緊接之后細(xì)胞毒性強(qiáng)烈，融合細(xì)胞的數(shù)量很少。

 

 

◆安全性說明

 

HVJ-E失活的確認(rèn)（確認(rèn)無感染性病毒的存在）

 

1.	細(xì)胞增值實驗（熒光灶單元（FFU）法） 處理LLC-MK2細(xì)胞，一到兩天后，病毒生長性的HVJ融合蛋白F抗體通過熒光抗體法測定，已證實未檢測到病毒蛋白。<制造階段實驗>
2.	受精卵生長試驗（血凝單位測定） 處理受精卵，3天后的病毒增殖，包括在HVJ表面的HN蛋白的紅血細(xì)胞聚合活性（HAU）測量作為指標(biāo)，已經(jīng)證實，沒有看到病毒的生長。<制造階段實驗>
3.	小鼠感染性研究 鼻腔給藥小鼠和未處理小鼠（SIX周）在相同籠中飼養(yǎng)，通過測定血清中的抗HVJ抗體滴度進(jìn)行了個體之間感染性的檢測。其結(jié)果是，在非給藥的情況下未觀察到抗體滴度增加，表明未感染HVJ-E。
4.	動物個體的遺傳基因?qū)雽嶒?/span> 小鼠、大鼠等實驗動物的各種藥物實驗（肺、氣管、肝和靜脈等）。已證實*沒有病毒感染或是可疑的事例。

 

 

◆產(chǎn)品列表

 

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
388-18721	GenomONE®-CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents GenomONE®- CF EX 仙臺病毒包膜（1只裝）細(xì)胞融合試劑	1 set
384-18723		4 sets
382-18724		16 sets