CYTO-ID^® Autophagy Detection Kit使用新型染料檢測(cè)自噬小泡和監(jiān)控活細(xì)胞自噬流，選擇性標(biāo)記積累的自噬小泡。染料已通過(guò)優(yōu)化，不染溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無(wú)需細(xì)胞轉(zhuǎn)染，可以在活細(xì)胞中監(jiān)控細(xì)胞自噬的快速定量方法。

　　胞內(nèi)物質(zhì)被擴(kuò)大的膜囊包裹，吞噬泡形成雙層膜囊泡，成為自噬體。自噬體外膜隨后與溶酶體融合，和內(nèi)部物質(zhì)被自噬性溶酶體降解。自噬的各種調(diào)節(jié)因子也被描繪于圖中。

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自噬原理圖

省時(shí)省力，無(wú)需轉(zhuǎn)染即可自快速全面的標(biāo)記自噬小泡

　　為了演示CYTO-ID^® Green detection reagent的優(yōu)勢(shì)，先用RFP-LC3表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞， 10μM的Tamoxifen處理過(guò)夜，然后用CYTO-ID^® 綠色檢測(cè)試劑染色。LC3轉(zhuǎn)染法需要過(guò)夜，而CYTO-ID^® 綠色檢測(cè)試劑的方法在15-30分鐘內(nèi)標(biāo)記細(xì)胞達(dá)100％。圖A：綠信號(hào)顯示自噬小泡的CYTO-ID?^® 綠染;圖B：成功轉(zhuǎn)染細(xì)胞的RFP-LC3表達(dá)（紅色）;圖C：自噬體的特異性標(biāo)記LC3，與CYTO-ID^® 綠色染料標(biāo)記的小泡共定位的復(fù)合圖像。

無(wú)轉(zhuǎn)染的自噬檢測(cè)

　　Hela細(xì)胞進(jìn)行饑餓與恢復(fù)，然后使用CYTO-ID^® Green detection reagent標(biāo)記。染料可以明確檢測(cè)和量化自噬及與自噬誘導(dǎo)相關(guān)的自噬小泡前體。圖1A：穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3的CHO細(xì)胞，結(jié)果顯示對(duì)照組與饑餓的細(xì)胞群的相對(duì)較差的基線分離，自噬難以量化。圖1B：CYTO-ID^® Autophagy Detection Kit特異性標(biāo)記LC3蛋白依賴的自噬小泡，免去轉(zhuǎn)染操作。

自噬積累和自噬流的可視化

　　可用熒光顯微鏡觀察CYTO-ID^® 自噬綠色染料檢測(cè)的自噬液泡積累和自噬流。Hela細(xì)胞用以下試劑進(jìn)行模擬誘導(dǎo)，0.2% DMSO（A）和100μM  Clonidine hydrochloride（B）進(jìn)行誘導(dǎo)，5μM Loperamide hydrochloride和1 μM PP242 hydrate（D）在37°C誘導(dǎo)12小時(shí)。處理后，細(xì)胞在37℃下用CYTO-ID^® Green Detection reagent孵育10分鐘，再用分析緩沖液清洗。細(xì)胞核被Hoechst 33342染料復(fù)染為藍(lán)色。

避免非特異性溶酶體染色的背景干擾

　　相比其他MDC染色溶酶體檢測(cè)，CYTO-ID^® 綠色染料無(wú)溶酶體染色背景，CYTO-ID^® Autophagy kit無(wú)需紫外活細(xì)胞分析，在顯微鏡共標(biāo)記應(yīng)用中，與Hoechst染料兼容。

使用流式細(xì)胞儀通過(guò)CYTO-ID^® Autophagy Detection Kit分析自噬

　　對(duì)照組（紅線峰值）無(wú)誘導(dǎo)，10 uM Tamoxifen (ALX-550-095)處理Jurkat細(xì)胞（白血病T細(xì)胞）（藍(lán)線峰值）。處理18小時(shí)后，細(xì)胞結(jié)合CYTO-ID^® 綠色檢測(cè)試劑，然后不經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀清洗，進(jìn)行分析。結(jié)果通過(guò)直方圖呈現(xiàn)。對(duì)照組細(xì)胞被染色，但熒光亮度低。實(shí)驗(yàn)組中，CYTO-ID^® 綠色熒光信號(hào)增加約2倍，表明Tamoxifen處理能引起Jurkat細(xì)胞中自噬的增加。

　　使用mTOR激酶抑制劑Rapamycin處理HepG2細(xì)胞孵育過(guò)夜，結(jié)果顯示CYTO-ID^® 染色信號(hào)升高。

CYTO-ID^® 綠色染料大多與RFP-LC3蛋白共定位。0.1μM Rapamycin（典型自噬誘導(dǎo)劑）處理過(guò)夜，轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞表達(dá)RFP-LC3。A: CYTO-ID^® Green染色； B: RFP-LC3； C: 合成圖像。

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

備注

應(yīng)用

ENZ-51002-25

細(xì)胞凋亡/壞死檢測(cè)試劑盒

25 assays

多重檢測(cè)，區(qū)分正常、

早期凋亡、晚期凋亡和壞死細(xì)胞，與GFP和其他綠色熒光探針兼容。

FC，熒光顯微鏡，熒光檢測(cè)

ENZ-51002-100

100 assays

ENZ-51021-K200

細(xì)胞核綠色染色體皺縮檢測(cè)試劑盒

1 Kit

高滲透性的綠色熒光染色增強(qiáng)了細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)染色質(zhì)固縮。

FC，熒光顯微鏡，熒光檢測(cè)

ENZ-52406

DNA染色試劑盒（紅色熒光）

200 µl

細(xì)胞可滲透的DNA染色應(yīng)用廣泛。

≥93％（HPLC），F(xiàn)C，熒光檢測(cè)

ENZ-CHM103-0200

Nuclear ID^® 藍(lán)色DNA染色（GFP細(xì)胞系）

200 µL

細(xì)胞可滲透的DNA染色應(yīng)用廣泛。

≥93％（HPLC），F(xiàn)C，熒光檢測(cè)

ENZ-51015-KP002

溶酶體細(xì)胞毒理檢測(cè)試劑盒（紅色熒光）（綠色細(xì)胞系）

1 Kit

快速，定量和HTS-兼容的檢測(cè)活細(xì)胞毒性試劑。

熒光顯微鏡，熒光檢測(cè)

ENZ-51035-0025

蛋白內(nèi)穩(wěn)態(tài)^® 聚集體 檢測(cè) 試劑盒

25 tests

Robust、定量的聚集小體用于神經(jīng)退行性疾病，肝病和毒理學(xué)研究

FC，熒光顯微鏡，熒光檢測(cè)

ENZ-51035-K100

100 tests