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商品屬性：

背景：

5(6)-CFDA, SE 是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞示蹤染料，不僅可用于細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗(yàn)，還可用于追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。5(6)-CFDA, SE 是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后，被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺（carboxyfluoresceinsuccinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強(qiáng)烈的綠色熒光，不能穿透細(xì)胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE 還可自發(fā)并不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，同時過量且未被偶聯(lián)的 5(6)-CFDA, SE 通過被動擴(kuò)散回到細(xì)胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng) 5(6)-CFDA, SE 標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達(dá)數(shù)月，因此非常適用于細(xì)胞群落分析。5(6)-CFDA, SE 標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如 PKH26，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也很均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀（FL1 通道）根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測出未分裂細(xì)胞，分裂一次（1/2 的熒光強(qiáng)度），二次（1/4 的熒光強(qiáng)度），三次（1/8 的熒光強(qiáng)度），以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。5(6)-CFDA, SE 可檢測分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。

標(biāo)記：

1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜。

3.孵育細(xì)胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 將細(xì)胞以 104-105 個細(xì)胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細(xì)胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標(biāo)儀測量 450nm 處的吸光度。

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