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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過(guò)度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

IMR-32人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無(wú)菌，且須在無(wú)菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來(lái)源于不同動(dòng)物種類(lèi)、組織類(lèi)型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用。可根據(jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過(guò)短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過(guò)小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過(guò)大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過(guò)程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

GALNT10： 多肽N-乙?；肴樘寝D(zhuǎn)移酶10抗體 小鼠骨髓間充質(zhì)肝細(xì)胞(MMSC-bm)(5×105)

人腎皮質(zhì)上皮細(xì)胞總RNAHRCEpiC NA 人腫瘤特異性抗原(TSA) ELISA 試劑盒 IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml

GALNT11： 多肽N-乙酰基半乳糖轉(zhuǎn)移酶11抗體 雜交瘤(B類(lèi));Z1510C6D10F4G6 小鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

CD28 Others Human 人 CD28 / TP44 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)ELISA 試劑盒 IgG/APC APC標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml

GALNT12： 多肽N-乙?；肴樘寝D(zhuǎn)移酶12抗體 人虹膜色素上皮細(xì)胞cDNAHIPEpiC cDNA

IgG2b Others Mouse 小鼠 IgG2b-Fc 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 大鼠酶2(CA-2)ELISA 試劑盒 IL-2(Human Interleukin 2)  人白介素2 96T

Nck1： NCK銜接蛋白1抗體 臺(tái)盼藍(lán)TB

OP9小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 OP9 mouse bone marrow somal cells a-MEM培養(yǎng)基+20%FBS 大鼠酶(CA)ELISA試劑盒 cath-K  大鼠組織蛋白酶K 96T

alpha Internexin： α-中連蛋白抗體 KLK11 Others Human 人 KLK11 / Kallikrein-11 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CL-0111HL-7702(人肝正常細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠酶(CA)ELISA 試劑盒 CR(Mouse Calretinin)  小鼠鈣結(jié)合蛋白 96T

IMR-32人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞ICA1： 胰島細(xì)胞自身抗原1抗體 CM-H055人卵巢上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

EAC細(xì)胞，小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞 R 1610(中國(guó)倉(cāng)鼠體細(xì)胞) 鯉魚(yú)尾鰭細(xì)胞;YZ16 人白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA 試劑盒 NTCP(Na+/taurocholate Cotransporting Polypeptide) 離子/磺膽酸共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原 0.5mg

Islet 2： 胰島素基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白2抗體 OLFM4 Others Human 人 OLFM4 / Olfactomedin-4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人絨癌細(xì)胞;JEG-3 人白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA 試劑盒 Ghrelin 28 腦腸肽28 0.5mg

IL-16： 白介素-16抗體 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;SH-SY5Y