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慢性移植物抗宿主病狼瘡小鼠模型

2018-8-24 閱讀(1863)

慢性移植物抗宿主病狼瘡小鼠模型

(1)復(fù)制方法  體重為16g左右、年齡為6~8周齡的(雌性DBA/2×雄性C57BL/6J)F1代小鼠,通過(guò)尾靜脈注射其母鼠DBA/2淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)模型,觀察12周。先麻醉處死 DBA/2小鼠,無(wú)菌分離其脾臟、胸腺、淋巴結(jié),比例為3:2:1,將所取組織在生理鹽水中研磨,過(guò)150μm和70μm尼龍篩,鏡下觀察細(xì)胞存活狀況,并計(jì)算細(xì)胞數(shù)量。將制備好的淋巴液活細(xì)胞經(jīng)F1代鼠尾靜脈注入體內(nèi),注射劑量為每只鼠50×1000000個(gè)淋巴液活細(xì)胞,注射時(shí)間分別為0、3、7及10d,觀察12周。分別于實(shí)驗(yàn)預(yù)定時(shí)間收集模型小鼠尿液作尿蛋白濃度測(cè)定,同時(shí)采血測(cè)定血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、白蛋白(ALB)等指標(biāo);并用間接免疫熒光法檢測(cè)自身抗體dsDNA,用熒光顯微鏡觀察。取模型小鼠腎臟,分別作冰凍切片、常規(guī)石蠟切片及電鏡超薄切片,光鏡和透射電鏡下觀察。

(2)模型特點(diǎn)  注射淋巴液活細(xì)胞后第4周起,模型小鼠活動(dòng)減少,第8周時(shí)體重開(kāi)始增加,毛發(fā)略暗,大部分小鼠可見(jiàn)皮下水腫,部分動(dòng)物出現(xiàn)大量腹水,有的小鼠有抽搐樣表現(xiàn);注射后第10周,模型小鼠腹部明顯增大,行動(dòng)遲緩,毛發(fā)無(wú)光澤;肉眼可見(jiàn)其腹腔內(nèi)有大量清澈腹水,脾臟、腎臟體積明顯增大,腎臟蒼白,分離血清呈乳糜樣,小鼠成模率為96%,未成模小鼠均為雄性。F1代小鼠注射母鼠淋巴細(xì)胞后2周即產(chǎn)生自身抗體,出現(xiàn)蛋白尿;4周時(shí)F1代小鼠血脂、血清肌酐、尿素氮輕度升高,鏡下觀察僅可見(jiàn)腎組織內(nèi)系膜細(xì)胞輕度增生,無(wú)間質(zhì)損害;8周時(shí)小鼠血液生化指標(biāo)明顯改變,白蛋白和總蛋白升高,至12周后白蛋白和總蛋白減少,鏡下觀察腎小球系膜細(xì)胞中度增生,間質(zhì)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管內(nèi)有大量蛋白管型;12周時(shí)腎小球系膜呈中到重度增殖,內(nèi)皮下可見(jiàn)大量免疫復(fù)合物,有局灶性或彌漫性腎小球硬化,出現(xiàn)類似人類Ⅵ型狼瘡腎炎表現(xiàn)。10~12周時(shí)各項(xiàng)觀察指標(biāo)均改變明顯,免疫熒光示IgG、 IgM、C3沿毛細(xì)血管壁及系膜區(qū)沉積。本方法建立的狼瘡小鼠模型制作簡(jiǎn)便,時(shí)間短,發(fā)病迅速,病變特征典型,成模率高。

(3)比較醫(yī)學(xué)  系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種嚴(yán)重危害人類健康的自身免疫性疾病,其發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明,為深入探討其發(fā)病機(jī)制及防治方法,選擇合適而理想的動(dòng)物模型非常重要。以往研究報(bào)道中常用自發(fā)狼瘡小鼠模型,如 NZB/NZW、MRL、BXSB等小鼠,這些小鼠可自行發(fā)生并發(fā)展為SLE,但存在耗時(shí)長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)條件較難控制等缺點(diǎn),影響了這些模型的使用價(jià)值。慢性移植物抗宿主病(chronic graft- versus-host disease, cGVHD)狼瘡樣小鼠模型是上*的狼瘡小鼠模型,可通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法誘導(dǎo),實(shí)驗(yàn)條件易控制;且發(fā)病早,誘導(dǎo)后12周即可出現(xiàn)典型的狼瘡性腎炎病理改變,其病變與人類狼瘡性腎炎的典型表現(xiàn)相似,尤其適合作狼瘡性腎炎的研究。慢性移植物抗宿主病(cGVHD)小鼠模型的發(fā)病特點(diǎn)是淋巴樣增生,它可產(chǎn)生與臨床SLE患者相似的自身抗體,以及嚴(yán)重的免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎臟疾病。本模型致病機(jī)制是將親代淋巴細(xì)胞移植給F1代鼠而誘導(dǎo),發(fā)病機(jī)制為MHC類部分不相容。本模型中母鼠DBA/2的基因型為H-2d,父鼠(C57BL/6或C57BL/10等)的基因型為H-2b,而它們雜交后獲得的F1代小鼠基因型是H-2d/b,其 MHC類部分相同。由于供體DBA/2小鼠缺少抗F1代小鼠 T細(xì)胞同種異體的細(xì)胞毒性CD8+T細(xì)胞,MHC一類CD8+ T細(xì)胞沒(méi)有活性,伴隨體內(nèi)INF-γ含量下降及CTL細(xì)胞減少;供體抗同種異體MHC-Ⅱ類CD4+T細(xì)胞激活受體B細(xì)胞,導(dǎo)致F1代小鼠體內(nèi)B細(xì)胞大量增殖,從而產(chǎn)生自身抗體,終導(dǎo)致出現(xiàn)SLE樣表現(xiàn)。本方法建立的慢性移植物抗宿主病狼瘡樣小鼠模型與臨床人類狼瘡性腎炎相似,是一種較為理想的狼瘡腎炎模型。



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