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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2018-10-12 閱讀(2603)
腔隙性腦梗死為缺血性腦卒中的重要一型，由腦部深穿動脈及其分支的特殊病變所至。采用腦內(nèi)大血管注射月桂酸鈉可選擇性損傷大鼠腦穿支動脈內(nèi)皮細胞，導(dǎo)致微小動脈內(nèi)原位血栓形成，從而建立大鼠腔隙性腦梗死模型。
(1)復(fù)制方法 雄性大鼠，體重為250～300g。經(jīng)腹腔注射戊巴妥鈉(按50～60mg/kg體重的劑量)或水合氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)麻醉后，剪除頸部毛發(fā)，手術(shù)區(qū)皮膚常規(guī)消毒。頸部切口，分離右側(cè)頸總、頸內(nèi)和頸外動脈，結(jié)扎同側(cè)枕動脈、甲狀腺上動脈、翼腭動脈及頸外動脈遠心端。PE-50導(dǎo)管插入頸內(nèi)動脈，向頸內(nèi)動脈內(nèi)緩慢注入含100μg的月桂酸鈉溶液0.1ml，期間用微動脈夾暫時夾閉頸總動脈。術(shù)畢結(jié)扎頸內(nèi)動脈，縫合切口，并消毒創(chuàng)面。48h后，動物麻醉后PE-50導(dǎo)管插入頸總動脈。第2次注射同等量的月桂酸鈉溶液于頸總動脈，隨后結(jié)扎頸總動脈。
(2)檢測方法和指標(biāo)
1)行為學(xué)檢測于第2次注射月桂酸鈉3d后對動物進行行為學(xué)檢測。
①姿勢反射試驗：距地面1m提起鼠尾，通過觀察其雙前肢的姿勢進行評分。無神經(jīng)功能缺損者為0分，表現(xiàn)為雙前肢伸展；輕度神經(jīng)功能缺損者為1分，表現(xiàn)為左前肢貼向前胸；重度神經(jīng)功能缺損者為2分，除有1分的表現(xiàn)外，其上半身卷曲。
②肢體不對稱應(yīng)用試驗：試驗在直徑20cm，高30cm的圓桶中完成。正常情況下，大鼠在圓桶中用雙前肢觸及桶壁，且應(yīng)用雙側(cè)前肢的頻率應(yīng)該相等。有缺血損傷的鼠偏癱側(cè)肢體應(yīng)用較少?？蓱?yīng)用下列公式進行評分。
(右前肢獨立應(yīng)用的次數(shù)－左前肢獨立應(yīng)用的次數(shù))÷(右前肢獨立應(yīng)用的次數(shù)+左前肢獨立應(yīng)用的次數(shù)+雙側(cè)前肢同時應(yīng)用的次數(shù))
2)組織學(xué)檢測 行為學(xué)測試結(jié)束后處死動物。10％甲醛固定鼠腦，從前腦額極起，每隔2mm冠狀切片(片厚5βm)，共取5片，第3片即可包含海馬區(qū)。磷烏酸蘇木精染色(PTAH)行組織學(xué)觀察；勒克司堅牢藍-HE染色(Luxol fast blue-HE, LFB-HE)用以進行腦梗死面積測定；也可進行透射電鏡技術(shù)制備成半薄片和超薄片，在電鏡下觀察。取材部位包括注藥側(cè)大腦中動脈、海馬、皮質(zhì)和丘腦區(qū)域。
(3)檢測結(jié)果
1)行為學(xué)檢測結(jié)果顯示 在姿勢反射試驗中，70％以上的動物出現(xiàn)輕、重度神經(jīng)功能缺損。在肢體不對稱應(yīng)用試驗中，腦損傷的動物平均分數(shù)明顯大于空白對照組。
2)光學(xué)顯微鏡分析 PTAH染色鏡下見部分小血管周圍間隙擴張及周圍腦組織水腫。白質(zhì)內(nèi)穿支小動脈血管內(nèi)皮細胞腫脹，管腔內(nèi)血小板附壁，血小板之間纖維蛋白絲早期形成；LFB-HE染色見大鼠注藥側(cè)大腦半球的皮質(zhì)、丘腦、海馬區(qū)有多發(fā)的腔隙梗死灶，組織片染色表現(xiàn)為淡染病灶。有早、中、晚期的軟化灶，有的病灶中心囊性變。
3)超微結(jié)構(gòu)分析 大鼠注藥側(cè)大腦半球的皮質(zhì)、丘腦、海馬區(qū)可見毛細血管內(nèi)皮均有不同程度的破壞、隆起。部分管腔可見壞死脫落的內(nèi)皮細胞。毛細血管外側(cè)星形細胞足突不同程度腫脹，血腦屏障破壞，血管鄰近的神經(jīng)細胞固縮。注藥對側(cè)大腦半球毛細血管內(nèi)皮完整、無損傷，星形細胞無腫脹。注藥側(cè)大腦中動脈內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細胞無破壞。
(4)模型特點 月桂酸鈉可選擇性損傷穿支動脈內(nèi)皮細胞，對大腦中動脈無影響。穿支動脈周圍間隙的增加表明月桂酸鈉對內(nèi)皮細胞可能是一種直接的損害，由此而導(dǎo)致了血管通透性的增加。損傷后的小血管壁可觸發(fā)血小板黏附和聚集，與凝血系統(tǒng)共同參與血栓的形成，所形成的微血栓位于受損小動脈的原位，且包含有纖維蛋白絲。電鏡下受損血管周圍的神經(jīng)元固縮，顯示隨后發(fā)生的小梗死灶與局部微血栓的形成有密切關(guān)系。血流在從大動脈流向小動脈的過程中速度是逐漸減慢的，因此推測月桂酸鈉與穿支動脈壁之間的接觸時間大大長于與大動脈的接觸時間，這一時間的不同是造成選擇性穿支動脈內(nèi)皮損傷的原因。月桂酸鈉損傷穿支動脈內(nèi)皮的程度有賴于給藥劑量和給藥時間兩個因素，以100μg/次，2次注射為宜。這是造成穿支動脈內(nèi)皮損害，并能在原位形成小梗死灶，同時對大腦中動脈不造成損害的合適條件。
(5)比較醫(yī)學(xué) CLI在臨床表現(xiàn)為相應(yīng)的腔隙綜合征，兩次注射月桂酸鈉的過程基本模擬臨床CLI患者急性期的發(fā)病特點。月桂酸鈉注射3d后大多數(shù)動物行為學(xué)表現(xiàn)異常，這與部分患者于發(fā)病后72h左右癥狀達高峰相吻合。實驗第6日大多數(shù)鼠有多發(fā)的小梗死灶存在，病變多分布于丘腦、海馬、皮質(zhì)，符合臨床CLI病灶的分布特點。梗死灶大小也符合CLl的診斷標(biāo)準。此模型為研究該病的病理生理和開發(fā)針對性強的神經(jīng)保護劑具有的價值。
