欧美……一区二区三区,欧美日韩亚洲另类视频,亚洲国产欧美日韩中字,日本一区二区三区dvd视频在线

上海申知心生物科技有限公司

主營(yíng)產(chǎn)品: 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型

11

聯(lián)系電話

021-56570878

您現(xiàn)在的位置: 上海申知心生物科技有限公司>>實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)>>細(xì)胞實(shí)驗(yàn)>> transwell實(shí)驗(yàn)服務(wù)

公司信息

聯(lián)人:
張經(jīng)理
話:
021-56570878
機(jī):
15221734409
真:
址:
上海市長(zhǎng)江南路180號(hào)長(zhǎng)江軟件園B區(qū)B627號(hào)
編:
個(gè)化:
www.shshenzx.com
網(wǎng)址:
www.shshenzx.com
鋪:
http://www.hbwxwy.cn/st308568/
給他留言
transwell實(shí)驗(yàn)服務(wù)
transwell實(shí)驗(yàn)服務(wù)
參考價(jià) 99
訂貨量 1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)
  • 品牌 其他品牌
  • 廠商性質(zhì) 代理商
  • 所在地 上海市

更新時(shí)間:2023-08-28 07:46:27瀏覽次數(shù):1962

聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

【簡(jiǎn)單介紹】
transwell實(shí)驗(yàn):Transwell放入培養(yǎng)板后,分為兩室:Transwell小室內(nèi)稱上室,盛裝上層培養(yǎng)液;培養(yǎng)板內(nèi)稱下室,盛裝下層培養(yǎng)液。上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。
【詳細(xì)說(shuō)明】

transwell實(shí)驗(yàn)

transwell實(shí)驗(yàn)
一類有通透性的杯狀的裝置;其外形為一個(gè)可放置在孔板里的小杯子,杯子底層的一張有通透性的膜(一般為聚碳酸酯膜)。該膜微孔的大小在0.1-12.0µm之間。
Transwell放入培養(yǎng)板后,分為兩室:Transwell小室內(nèi)稱上室,盛裝上層培養(yǎng)液;培養(yǎng)板內(nèi)稱下室,盛裝下層培養(yǎng)液。上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。

應(yīng)用
細(xì)胞種在上室內(nèi),因聚碳酸酯膜有通透性,故可研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)等的影響。
根據(jù)transwell的特點(diǎn)(孔徑,膜),可進(jìn)行如下方面研究:
1.共培養(yǎng)                   孔徑<3.0um
研究下室細(xì)胞B代謝物(分泌物)對(duì)上室細(xì)胞A的影響。
2.細(xì)胞趨化               孔徑可選擇5.0、8.0、12.0µm
研究進(jìn)入下室的細(xì)胞量,反映下室成分對(duì)上室細(xì)胞的趨化能力
3.細(xì)胞遷移               孔徑常選擇8.0、12.0µm
研究進(jìn)入下室的細(xì)胞量,反應(yīng)上室細(xì)胞的遷移能力
4.細(xì)胞侵襲               孔徑常選擇8.0、12.0µm,膜上室側(cè)鋪有基質(zhì)膠,
研究進(jìn)入下室的細(xì)胞量,反映上室細(xì)胞的侵襲能力

具體應(yīng)用例子
一、腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(transwell)
原理:
模仿體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì),細(xì)胞只有分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs),降解基質(zhì)膠才可進(jìn)入下室。

步驟
1.  Transwell小室準(zhǔn)備
1)無(wú)基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 包被基底膜:
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀釋,無(wú)血清培養(yǎng)基作為稀釋液
B. 取適量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),4℃操作。
C. 37℃培養(yǎng)箱中,孵育4-5h(>5h);出現(xiàn)“白色層"時(shí),說(shuō)明已經(jīng)變?yōu)楣虘B(tài)。

2)有基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 小室放入培養(yǎng)板中,上室加入300µl預(yù)溫的無(wú)血清培養(yǎng)基
B. 室溫下靜置15-30min,使基質(zhì)膠再水化
C. 再吸去剩余培養(yǎng)液。

2.細(xì)胞懸液準(zhǔn)備
1)消化、收集細(xì)胞;
2)PBS洗1-2次
3)用含BSA的無(wú)血清培養(yǎng)基重懸(細(xì)胞密度約在1-10×105/ml)。

3. 細(xì)胞接種
1)取適量細(xì)胞懸液加入Transwell小室(按transwell說(shuō)明)。24孔板小室一般200µl。
2)24孔板下室一般加入500µl含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基。注意避免氣泡產(chǎn)生(下層培養(yǎng)液和小室間)
3) 培養(yǎng)細(xì)胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(主要依癌細(xì)胞侵襲能力而定)。

4. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)
檢測(cè)穿過(guò)的細(xì)胞數(shù)有兩種方法:
1 ) 直接計(jì)數(shù)法
“貼壁"細(xì)胞計(jì)數(shù):
“貼壁"是指細(xì)胞穿過(guò)膜后,可以附著在膜的下室側(cè)而不會(huì)掉到下室里面去。 通過(guò)給細(xì)胞染色,可在鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞
A. 用棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細(xì)胞
B. 染色:常用的0.1%結(jié)晶紫染色。
優(yōu)點(diǎn):(1) 不需固定細(xì)胞,直接染色即可。
(2) 配制簡(jiǎn)單方便。
(3) 可以用33%醋酸脫色,測(cè)量洗脫液OD570值,間接反映細(xì)胞數(shù)
注意,染色前要將膜風(fēng)干,否則可能會(huì)染不上。
C. 細(xì)胞計(jì)數(shù):
(1) 顯微鏡進(jìn)行觀察和拍照
(2) 取3-5個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞個(gè)數(shù)

2) 間接計(jì)數(shù)法
用于穿過(guò)細(xì)胞過(guò)多,而無(wú)法通過(guò)計(jì)數(shù)獲得準(zhǔn)確的細(xì)胞數(shù)。
MTT法
A. 棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細(xì)胞
B. 24孔板中加入500µl含0.5mg/ml MTT的培養(yǎng)基,將小室浸沒(méi)于其中,置于37℃2-4h后取出。
C. 24孔板中加入500µl DMSO,將小室浸沒(méi)于其中,振蕩結(jié)晶充分溶解。
D. 取出小室,測(cè)所得DMSO的OD值。
結(jié)晶紫檢測(cè)
A. 棉簽擦去基質(zhì)膠和上室內(nèi)的細(xì)胞
B. (可選)甲醛固定30分鐘,室溫
B. 24孔板中加入500µl  0.1%結(jié)晶紫溶液,將小室浸沒(méi)于其中,室溫放置20分鐘
C. 24孔板中加入500µl 33%醋酸,將小室浸沒(méi)于其中,脫色。
D. 取出小室,測(cè)量洗脫液OD570值。
優(yōu)點(diǎn):染色和脫色的過(guò)程并不影響膜上細(xì)胞,在脫色后還可重新染色。

5. 注意點(diǎn)
①Transwell小室:
注意是否是預(yù)先鋪好膠
② 上層培養(yǎng)液:
上層培養(yǎng)液采用無(wú)血清培養(yǎng)基,為維持滲透壓,一般加入0.05%-0.2% BSA。
③ 細(xì)胞:
有侵襲能力的細(xì)胞才可用于Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。
④ 基質(zhì)膠:
常用的是人工重構(gòu)基底膜材料Matrigel
⑤ 下層培養(yǎng)液:
下層常用含5%-10% FBS的培養(yǎng)基,具體濃度根據(jù)細(xì)胞侵襲力而定,侵襲力弱的細(xì)胞可適當(dāng)提高FBS濃度。
⑥ 細(xì)胞培養(yǎng)板:
細(xì)胞培養(yǎng)板應(yīng)當(dāng)與購(gòu)買(mǎi)的Transwell小室相配套。

二、腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)(Transwell)
過(guò)程與Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)基本*,不同的只是不需要鋪Matrigel。
步驟
1.Transwell放入預(yù)先每孔加有600ul的培養(yǎng)基(含10%血清)的24孔板內(nèi),
2.在Transwell的內(nèi)室加入細(xì)胞(100ul,用含0.1%血清的培養(yǎng)基稀釋到所需密度),
3.放入細(xì)胞培養(yǎng)箱,培養(yǎng)時(shí)間后取出。
4.取出Transwell,用棉簽擦去膜(內(nèi)室一側(cè))的細(xì)胞
5.另一面的細(xì)胞用甲醛室溫固定30分鐘
6. 結(jié)晶紫染色20分鐘,
7. PBS或清水洗3次,
8.顯微鏡下觀察細(xì)胞,記數(shù)。




產(chǎn)品對(duì)比 產(chǎn)品對(duì)比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪

對(duì)比框

在線留言
国产免费一区二区三区不-日本少妇免费一区二区三区| 国产aa视频一区二区三区-国产精品久久久久久久毛片动漫| 亚洲综合av一区二区三区-高潮又爽又黄无遮挡激情视频| 中文字幕日韩精品不卡在线一区-国产tv日韩在线观看视频| 丝袜高跟熟女视频国产-熟女少妇亚洲一区二区| 国产欧美日本一区二区-一区二区三区亚洲在线播放| 两性污污视频网站在线观看-亚洲欧美日韩激情一区| 亚洲欧美激情自拍色图-国产亚洲精品sese在线播放| 蜜臀一区二区三区精品在线-99久久久精品免费看国产| 蜜臀一区二区三区精品在线-99久久久精品免费看国产| 丝袜高跟熟女视频国产-熟女少妇亚洲一区二区| 久久免费观看归女高潮特黄-黄色av一本二本在线观看| 人妻少妇无乱码中文字幕-人成免费视频一区二区| 欧美mv日韩mv视频-熟妇人妻ⅴa精品中文| 日韩国产一区二区三区在线-精品日韩人妻少妇av| 99热在线精品免费6-av一区二区在线观看| 97人妻精品一区二区三区爱与-日韩精品亚洲专区在线观看| 国产精品中出久久久蜜臀-久久久中国精品视频久久久| 国产一区二区三区四区五区麻豆-欧美一级在线视频播放| 欧美三级韩国三级日本三斤-日本不卡一区不卡二区| 午夜精品午夜福利在线-内射无套内射国产精品视频| 91精品国产无线乱码在线-999精品视频免费看| 色婷婷六月婷婷一区二区-91草草国产欧美在线观看| 亚洲精品在线观看一二三区-在线观看国产中文字幕视频| 日本中文字幕永久在线人妻蜜臀-欧美一区二区的网站在线观看| 一级特黄大片亚洲高清-国产精品视频伊人久久| 国产剧情av中文字幕-五月婷婷在线手机视频| 美女把腿张开给帅哥桶-无码无套少妇18p在线直播| 日韩亚洲一区二区三区av-欧美综合在线观看一区二区三区| 免费av一区在线观看-国产精品视频高潮流白浆视频免费| 国产亚洲欧美一区91-亚洲欧美一区二区在线| 国产老熟女激情小视频-成人一区二区人妻不卡视频| 久久网址一区二区精品视频-日产国产欧美视频一区精品| 黄色91av免费在线观看-欧美黄片一级在线观看| 国产福利视频一区二区三区-日韩人妻中文视频精品| 一区二区国产高清在线-日本高清无卡一区二区三区| 欧美伦乱淫老妇女激情吧-亚洲女邻居精品二区久久| av噜噜国产在线观看-欧美视频亚洲视频一区二区三区| 亚洲欧美精品在线一区-99热国产在线手机精品99| 国产黄污网站在线观看-成人av电影中文字幕| 欧美视频在线观看国产专区-亚洲91精品在线观看|