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上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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聯(lián)系電話(huà)
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主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
聯(lián)系電話(huà)
Chip/CO-IP/Chip-seq
ChIP(Chromatin immunoprecipitation) 染色質(zhì)免疫共沉淀:染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)主要應(yīng)用于驗(yàn)證及探尋體內(nèi)環(huán)境中，蛋白質(zhì)和DNA的直接相互作用，旨在探索特定蛋白質(zhì)在DNA上的特定結(jié)合序列，常在研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及組蛋白修飾中被應(yīng)用到。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程大致為：交聯(lián)-解交聯(lián)-超聲打碎-免疫沉淀-洗滌-DNA純化-PCR檢測(cè)。
具體操作：
樣品準(zhǔn)備：培養(yǎng)細(xì)胞(若樣品為組織，可先培養(yǎng)原代細(xì)胞)；固定，或者直接活細(xì)胞送樣。
細(xì)胞固定：此步驟目的為將結(jié)合在DNA上的蛋白用共價(jià)形式交聯(lián)在所結(jié)合的位點(diǎn)上，避免在之后的操作步驟中脫離丟失。直接將甲醛加入細(xì)胞培養(yǎng)液，搖晃固定10分鐘后，迅速加入2.5M甘氨酸解交聯(lián)5分鐘，PBS洗滌，刮下細(xì)胞。
超聲打碎：此步驟目的為將長(zhǎng)鏈的DNA打碎成200-1000bp的DNA片段。使用設(shè)備是超聲水浴鍋，EP管在冰水混合物中超聲，超聲后細(xì)胞懸液變得澄清透明。離心取上清。
免疫沉淀：此步驟是加入特異性抗體和對(duì)照IgG，和結(jié)合抗體的磁珠（或protein A/G）。經(jīng)稀釋后，超聲產(chǎn)物分成兩份，分別加入特異性抗體和對(duì)照IgG，輪轉(zhuǎn)過(guò)液，第二天加入磁珠輪轉(zhuǎn)4小時(shí)。
洗滌：此步驟是減少非特異性結(jié)合。分別用稀釋緩沖液、低鹽溶液、高鹽溶液、氯化鋰溶液以及TE緩沖液洗滌共7次。用洗脫緩沖液在65℃洗脫過(guò)液。
DNA純化：將洗脫的產(chǎn)物用DNA純化試劑盒純化，得到50ul純化產(chǎn)物，用于檢測(cè)ChIP結(jié)果。
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