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Chip步驟

ChIP 實(shí)驗(yàn)操作流程： 
1 、樣品準(zhǔn)備與交聯(lián) 
細(xì)胞收集后，用37%的formaldehyde處理細(xì)胞，交聯(lián)核酸與DNA結(jié)合蛋白；
2. 超聲打斷染色質(zhì) 
裂解細(xì)胞，用Bioruptor將染色質(zhì)超聲破碎成200－1000bp片斷；將片段分為兩份，一份用于免疫共沉淀，一份用于對(duì)照。
3 、免疫共沉淀 (IP) 
取B步驟所得一份片斷與ChIP特異抗體結(jié)合進(jìn)行免疫共沉淀，利用免疫磁珠法富集抗體復(fù)合物。
4 、解交聯(lián)及純化 DNA 
將富集的DNA/蛋白復(fù)合物解交聯(lián)釋放DNA片段，并進(jìn)行純化（IP DNA）；B步驟所得用于對(duì)照（Input DNA）的片斷作不進(jìn)行IP實(shí)驗(yàn)，但也要解交聯(lián)并純化。
5 、 DNA 段 PCR 擴(kuò)增 
針對(duì)ChIP DNA, Input DNA及對(duì)照DNA的目的片段設(shè)計(jì)特異性引物并進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。
 6 、結(jié)果分析 
%Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×
Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)] 

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