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詳細(xì)介紹
Cellulose DE-32 DEAE 纖維素 DE-32
產(chǎn)品信息：
中文名稱：DEAE纖維素DE-32
英文名稱：DEAE cellulose DE-32；DEAE-Cellulose microgranular
其他名稱：二乙氨基乙基纖維素32；2-(二乙氨基)乙迷纖維素32
CAS號(hào)：9013-34-7
級(jí)別：柱層析
功能團(tuán)：二乙氨乙基
正常PH范圍：2～9.5
小離子電量：0.88～1.08meg/dg(dg=dry gram，千克重)
蛋白容積：700mg/dg（蛋白體積是指0.01M ph8.5磷酸緩沖液—牛血清白蛋白）
蛋白容積/柱體積：140mg/ml
每升所需的離子交換劑㎏柱床體積：0.24（離子交換劑重量的數(shù)字考慮到溶脹，容易去除及使用過程中離子離子交換剩余顆粒）
填料密度：0.20dg/ml（填料密度的狀態(tài)為0.05M PH7.5磷酸緩沖液）
性狀(以下信息僅供參考)：白色或微黃色顆粒狀或纖維狀。為中等堿度陰離子交換劑。對(duì)高相對(duì)分子質(zhì)量聚合電解質(zhì)有較好的解析。游離堿型。典型吸收值 (胰島素相對(duì)分子質(zhì)量12000)850mg/g、(牛血清蛋白)660mg/g。
用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)用于柱色譜分析，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等，陰離子交換填料
Cellulose DE-32 DEAE 纖維素 DE-32
層析柱裝填
- 吸附性層析一般建議裝填高度為 10~15cm 高，分子篩建議裝填高度為60~90cm
1）組裝柱（如有需要連接裝柱器）。
2）取下下柱頭用裝柱緩沖液沖洗柱底適配器，排除篩網(wǎng)下面的氣泡，將下柱頭安裝
在層析柱底部，旋緊調(diào)整旋鈕，并在層析柱底部保留 1cm 左右高度的液體。
3）用裝柱緩沖液重懸介質(zhì)，制成 50%~75%左右的介質(zhì)懸浮液。
4）一次性將介質(zhì)倒入柱管中，避免產(chǎn)生氣泡。
5）如連接有裝柱器，立即往裝柱器中緩慢加入裝柱緩沖液。將適配器或裝柱器上蓋
與層析系統(tǒng)相連接。
6）設(shè)定所需流速+，打開柱下端，啟動(dòng)泵，進(jìn)行壓柱。
7）柱床穩(wěn)定后保持 30min 以上，關(guān)閉泵和底閥。
8）如連接有裝柱器，移除裝柱器后連接適配器。
9）調(diào)節(jié)適配器，使其固定在膠面上 0.5~1cm 處，并保證適配器入口充滿液體。
10）打開底閥，連接泵，繼續(xù)用設(shè)定的流速（注意壓力不要超過 0.3Mpa）繼續(xù)壓柱
待膠面高度保持不變，標(biāo)記此時(shí)膠面高度
11）暫停機(jī)器，關(guān)閉底閥，斷開柱頭入口，調(diào)低適配器至膠面下 3~5mm 處。封閉
上柱口，裝柱完成。
6、柱效測(cè)定
裝填好的層析柱可以通過測(cè)柱效的方式來評(píng)價(jià)裝柱效果。
- 柱效測(cè)定可以采用丙酮作為指示劑也可以采用NaCl作為指示劑，按照下表配
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| 制指示劑溶液和流動(dòng)相。 |
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| 丙酮法測(cè)柱效 | NaCl法測(cè)柱效 | ||
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| 樣品 | 1.0% （ v/v ） 丙 | 2M NaCl（溶于水） | ||
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| 酮水溶液 |
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| 樣品體積 | 1.0%柱體積 | 1.0%柱體積 | ||
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| 流動(dòng)相 | 水 | 0.4M NaCl水溶液 | ||
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| 流速 | 30 cm/h | 30cm/h | ||
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| 檢測(cè)器 | UV 280 nm | 電導(dǎo)率 | ||
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- 計(jì)算柱效：
根據(jù)UV或者電導(dǎo)率曲線計(jì)算理論踏板高度（HETP）、理論塔板數(shù)（N）和非對(duì)
稱因子（As），公式如下：
HETP=L/N
N=5.54(VR/Wh)2
其中：VR=保留體積
Wh=半高峰寬
L=柱高
N=理論塔板數(shù)
VR和Wh的單位應(yīng)*；
As=b/a
其中：
a= 在10%峰高處的*個(gè)半
b= 在10%峰高處的第二個(gè)半
結(jié)果評(píng)價(jià)
由以上公式計(jì)算出的 HETP 的數(shù)值若小于三倍介質(zhì)平均顆粒大小 且非對(duì)稱因子在 0.8~1.8 則判定為層析柱狀態(tài)良好。對(duì)于不理想的 柱效需要分析原因甚至需要重新裝填層析柱。
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