核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ),核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的zui重要因素,也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。目前常見(jiàn)的核酸純化方法有PC抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法,這幾種方法各有其優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)。
一、PC抽提法
PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段,但超過(guò)了該飽和度,裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除,必須靠多次抽提,方可*去除。且每次抽提都會(huì)損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質(zhì)難以*去除,以及基因組DNA會(huì)斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個(gè)用途是,利用酸性酚可以部分去除DNA的特點(diǎn),在RNA抽提時(shí)獲得DNA殘留極少的RNA。不過(guò)有一點(diǎn)要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質(zhì)之前,是不能使用PC抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提zui大的優(yōu)勢(shì)是成本低廉,對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較低,對(duì)于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。
二、高鹽沉淀法
高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法,同樣也是一個(gè)非常不錯(cuò)的方法。與PC抽提方法相比,除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外,該方法幾乎克服了PC抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提,但其不足之處是純度(蛋白質(zhì)殘留)不夠穩(wěn)定,蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會(huì)更好一些。
三、離心柱法
離心柱純化法,是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其zui大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小,純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC純化方法更高)。加入的液體通過(guò)離心后會(huì)進(jìn)入另外一個(gè)離心管中,與含有核酸的柱子*是分開(kāi)的,所以洗滌更*。其致命弱點(diǎn)是樣品過(guò)量,提取效率較低,且需要反復(fù)離心,操作復(fù)雜,成本也較高。
四、生物磁珠法
生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級(jí)生物磁珠表面,通過(guò)介質(zhì)對(duì)核酸的吸附,在外加磁場(chǎng)下使核酸附著于磁珠定向移動(dòng),從而達(dá)到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比,生物磁珠法具有很多*的優(yōu)勢(shì),如:
?、偬崛§`敏度高(微量材料即可提取)
?、诩兓兌雀撸?與蛋白鹽等雜質(zhì)分離)
?、厶崛‘a(chǎn)量高(每mg磁珠能吸附500ugDNA)
?、芊蛛x快速(磁分離只需幾秒)
⑤自動(dòng)化操作(加液后*機(jī)器自動(dòng)化操作,無(wú)需人力,提率)
?、薷咄刻崛。赏瑫r(shí)完成幾十甚至幾百個(gè)樣品的提?。?/div>
⑦無(wú)毒無(wú)害無(wú)污染(試劑中不含任何氯仿、酚等,操作環(huán)境更加安全)
生物磁珠法純化核酸的普及需要磁分離裝置的同步跟進(jìn),如磁力架或自動(dòng)提取儀。目前,各類磁分離裝置主要來(lái)自于進(jìn)口,不僅價(jià)格較高,而且售后服務(wù)質(zhì)量也偏低。因此,向大家推薦洛陽(yáng)惠爾納米科技園自主研發(fā)的磁力架、磁力筆及全自動(dòng)核酸提取儀,該裝置通過(guò)技術(shù)創(chuàng)新,大大提高了靈活機(jī)動(dòng)性,在操作上更加方便快捷,有效解決了磁分離裝置對(duì)磁珠法核酸提取的限制,受到科研工作者的*。
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