水性C18色譜柱通用使用指南

閱讀：551發(fā)布時間：2024-6-20

水性C18色譜柱是一種專門設計用于在高水相流動相條件下工作的反相高效液相色譜（HPLC）柱。它通常用于極性和親水性化合物的分離。以下是水性C18色譜柱的通用使用指南：

1.色譜柱的安裝

檢查與連接：在安裝前確保色譜柱處于良好狀態(tài)，沒有損壞。使用適配器將色譜柱牢固地連接到HPLC系統(tǒng)中，確保無泄漏。

沖洗：在初次使用或長時間不使用之后，應使用純溶劑（如甲醇或乙腈）沖洗色譜柱，通常以0.5-1.0mL/min的流速進行15-30分鐘的沖洗。

2.流動相的選擇與制備

高水相流動相：由于這是水性C18色譜柱，應使用高水相比例的流動相，典型的是80%以上的水相。常用的水相包括純水、含有少量緩沖鹽的水溶液（如磷酸鹽緩沖液）。

有機相助溶劑：常用的有機相助溶劑包括乙腈或甲醇。根據(jù)目標化合物的極性，調整有機相比例。

pH調節(jié)：對于大多數(shù)分析物，流動相的pH值應該控制在色譜柱能夠承受的范圍內（通常為2-8），并且應盡量接近中性以保護色譜柱。

3.樣品制備

樣品溶劑：樣品應溶解在流動相中或與流動相相似的溶劑中，以減少峰形變差和拖尾現(xiàn)象。

過濾：樣品溶液應通過0.22μm或0.45μm的濾膜過濾，以除去顆粒物，防止堵塞色譜柱。

4.操作條件

流速：一般建議在0.5-1.5mL/min的流速范圍內操作，根據(jù)具體分析需求調整。

柱溫：控制柱溫在20-40°C之間，具體溫度根據(jù)分離效果優(yōu)化。

進樣量：為避免柱超載，通常推薦進樣量在1-20µL范圍內，根據(jù)樣品濃度和柱子尺寸調整。

5.色譜柱的維護

清洗：定期用高比例有機溶劑（如乙腈或甲醇）沖洗色譜柱，尤其是在連續(xù)使用后或更換流動相前。

儲存：短期存放時，用流動相進行沖洗并保持濕潤。長期存放時，建議用有機溶劑（如乙腈）沖洗后密封保存。

再生：如果色譜柱性能下降，可以嘗試用梯度沖洗法再生色譜柱，從高水相到高有機相，再返回高水相，逐步?jīng)_洗。

6.常見問題及處理

柱壓升高：檢查流動相和樣品是否有顆粒物，必要時更換過濾器或預柱。也可能需要用強溶劑沖洗色譜柱。

峰形變差：檢查樣品溶劑與流動相的匹配性，調整進樣量；確保色譜柱沒有堵塞或老化。

分離度下降：優(yōu)化流動相比例、流速和柱溫，或考慮更換色譜柱。

通過遵循以上指南，可以有效地使用和維護水性C18色譜柱，確保其最佳性能和長使用壽命。

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