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色譜柱孔徑選擇小知識
閱讀:5446發(fā)布時(shí)間:2015-12-22
1.測量法和表示
孔徑分布和比表面積可以通過相同的方法來測量,如:氮吸附法和汞空隙率測定計(jì)平均孔徑也能通過逆向分子排阻法來測量,但真正的孔徑分布不能用個(gè)方法來測量。不過,因其它方法存在一些問題,高聚物填料仍然要采用逆向分子排阻法。孔徑用nm或埃做單位??讖椒植嫉闹凳菢?biāo)稱的,而且不同生產(chǎn)商有不同的方法。所以,某生產(chǎn)商標(biāo)稱10nm的可能與另一生產(chǎn)商標(biāo)稱8nm或12nm的相同。
2.孔徑與保留
孔徑是填料物理性質(zhì)的一個(gè)基本因子,并決定顆粒相比率(phase ratio)。進(jìn)一步?jīng)Q定了填料的保留性質(zhì)和載樣量。
3.孔徑和分子量
被分析物分子小隨分子量增加而增大。如果其分子量大小約為孔徑的三分之一或大,則傳質(zhì)會嚴(yán)重受阻并造成低效能和峰展寬。這樣的情況下,要用更大孔徑的填料。對所有標(biāo)準(zhǔn)分析問題,通常用孔徑在大概6nm到13nm之間的填料。更大孔徑的填料也可以用在肽類分離上。分子量比肽更大的,如蛋白質(zhì),用30nm孔徑的填料更加合適。但這樣的填料與小分子作用的不好,因?yàn)楸缺砻娣e減少了。對被分析物分子量小于3000的,應(yīng)用孔徑小些的。被分析物分子量大于10000的,應(yīng)用孔徑30nm的填料。分子量介于3000到10000的,大的小的都可以得到滿意結(jié)果。
4.孔徑分布
大HPLC填料的孔徑分布跨度有一個(gè)數(shù)量級。這樣的分布對大多數(shù)實(shí)用目的已經(jīng)足夠的窄了。然而,微孔的減少時(shí)填料的性能提高了。這可能是有窄孔徑分布的填料如Waters Spherisorb的一個(gè)優(yōu)勢。
5.非孔填料
非孔填料能用于高分子量的、在大孔徑填料中表現(xiàn)出擴(kuò)散受限制的被分析物。但是,只能得到有限的比表面積。
6.選擇正確的孔徑
被分析物的分子量 推薦使用的填料孔徑
<3000 6到13nm
3000到10000 10nm
>10000(例如蛋白質(zhì)) 30到100nm
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