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Corning NK 細胞活化擴增套裝和競爭產品的比較
閱讀：2610發(fā)布時間：2018-2-6
Corning NK 細胞活化擴增套裝和競爭產品的比較
Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝支持NK細胞的快速擴增，NK細胞產量高（約8.6 萬億，擴增290倍），細胞殺傷力強（效應細胞：靶細胞=5:1 下殺傷力77.9%），與競爭產品相比很有優(yōu)勢。
比較項目 | 競爭產品B： NK 試劑盒 | 競爭產品C： NK 培養(yǎng)基 | |
接種容器 | 預包被T-75培養(yǎng)瓶 | 提供包被劑 | 沒有提供培養(yǎng)瓶和包被劑 |
組份 | Pre-coated T-75 flask 抗體預包被T75細胞培養(yǎng)瓶 50 mL NK細胞活化培養(yǎng)基 1.8 mL NK細胞活化添加劑 1L NK細胞擴增培養(yǎng)基 | 1mL包被劑 80mL活化培養(yǎng)基 2 L擴增培養(yǎng)基+1 mL 添加劑 | 500mL 培養(yǎng)基/瓶 |
操作友好度 | 方法清除，操作簡單 | 沒有zui終方法，NK培養(yǎng)需要自行優(yōu)化 | 沒有方法 |
抗凝劑兼容性 | 肝素，檸檬酸鈉 | 肝素 | 肝素，檸檬酸鈉 |
細胞產量（14天，30mL 血樣） | 約 3 萬億 | 約 0.64萬億 | 約 4.2 萬億 |
擴增倍數 | 約100倍 | 約32倍 | 約140倍 |
CD3-CD56+表型，14天 | 83% | 68% | 6% |
NK效應細胞數量 | 約2.5萬億 | 約0.4萬億 | 約0.3萬億 |
細胞殺傷力（ET=5:1，靶細胞K562） | 77.9% | 54.1% | 57.6% |
培養(yǎng)體積 | 1.5L | 1.0L | 1.0L |
周期 | 14天 | 14天 | 14天 |
Corning NK 細胞活化擴增套裝可以用于NK細胞的大量擴增，并且具有高活力和高殺傷能力。Corning NK 細胞活化擴增套裝飽和預包被T-75培養(yǎng)瓶，KBM NK活化培養(yǎng)基，KBM NK活化添加劑和KBM NK擴增培養(yǎng)基。前三個特別設計用于NK活化，zui后一個KBM NK擴增培養(yǎng)基于NK細胞擴增。NK活化培養(yǎng)基和擴增培養(yǎng)基生產都是使用高質量試劑和cGMP級的原料。培養(yǎng)基唯二所含培養(yǎng)基是注射級的血清白蛋白和重組人胰島素。
介紹
自然殺傷細胞（NK）是重要的免疫細胞，能識別并清除腫瘤和病毒感染。體外大量培養(yǎng)NK細胞，滿足過繼性免疫治療所需一向比較困難。據資料，現(xiàn)有的培養(yǎng)方法都是采用擴增培養(yǎng)基搭配細胞因子（IL-2，IL-7，IL-15）的方案，需要研究者自行優(yōu)化后使用。
Corning NK 細胞活化擴增套裝提供了NK 細胞活化擴增的全套材料和標準操作方法，所得NK細胞擴增能力強，活性和殺傷能力高。研究者無需優(yōu)化，而且使用步驟精簡。和競爭產品比較了NK細胞產量，活力和NK 細胞體外 陽性表達比率和殺傷能力。
鑒定方法
免疫表型
收獲細胞表面標記表達評估方法：CD3-CD56+陽性率。
100 μL PBS 加入 1 x 106 個細胞，CD3 FITC +CD56 PE抗體染色 20min，染色過程 室溫避光。孵育后，PBS 緩沖液清洗細胞，200 μL PBS 重懸，用于流式細胞分析。每個樣本收集1萬個events，再用histogram overlay subtraction method using BD Accuri C6 軟件。
CCK-8 細胞毒性檢測
K-562 細胞作為靶細胞。1 x 105 cells/mL的K-562 細胞和 5 x 105 cells/mL的效應細胞共培養(yǎng)（96孔培養(yǎng)板三份，終體積200 μL/孔），37°C 過夜。分析前，每孔添加20 μL細胞計數試劑（ Cell Counting Kit-8 solution ，CCK8, Sigma Cat. No. 96992）， 37°C ，5% CO2孵育1 h。數據讀?。篠pectraMax® M4 (Molecular Devices) multifunction microplate reader。
結果
圖1 使用不同品牌的NK擴增試劑盒比較細胞生長曲線和擴增能力。與競爭產品B，C相比，Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝擴增能力具有優(yōu)勢。
圖2 CCK-8 細胞殺傷活性檢測。NK細胞與K-562細胞共培養(yǎng)16 h后（效應細胞：靶細胞=5:1 ），Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝培養(yǎng)的NK 細胞殺傷能力77.9%，比競爭產品B (54.1%) 和C(57.6%) 有優(yōu)勢。
圖3 流式細胞分析NK細胞表面標志物。使用CD3-CD56+陽性率評估收獲細胞中NK細胞占比。Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝占比83.0%，高于競爭產品B (67.6%)和C(6.4%)。
結論
Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝支持NK細胞的快速擴增，NK細胞產量高（約8.6 萬億，擴增290倍），細胞殺傷力強（效應細胞：靶細胞=5:1 下殺傷力77.9%），與競爭產品相比很有優(yōu)勢。
Corning NK 細胞活化擴增套裝提供了NK 細胞活化擴增的全套材料和標準操作方法。無需優(yōu)化，而且使用步驟十分精簡。
原文：Zhu Xuejing, Liu Jian Corning Incorporated
Corning Life Sciences Asia Technology Center Shanghai 201206, China
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