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上海橋星貿(mào)易有限公司

主營產(chǎn)品: 進口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶

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公司信息

聯(lián)人:
蔣經(jīng)理
話:
021-65672052
機:
18221794820
真:
86-021-62097628
址:
上海市楊浦區(qū)寧國路229號13號樓704室
編:
200090
化:
www.qx147.com
網(wǎng)址:
www.qx5147.com
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http://www.hbwxwy.cn/st321209/
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植物線粒體DNA提取試劑盒
植物線粒體DNA提取試劑盒
參考價 1380
訂貨量 1
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號
  • 品牌
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 所在地 上海市

更新時間:2025-02-22 07:38:31瀏覽次數(shù):1834

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

【簡單介紹】
貨  號:D0218
名  稱:植物線粒體DNA提取試劑盒
規(guī)  格:50T/100T
價  格:1380/2560
【詳細說明】

植物線粒體DNA提取試劑盒

 一,試劑盒組份

組份

D0218 (50T)

D0218 (100T)

保存溫度

DNase I

12mg

22mg

-20
溶解后分裝

β-巰基乙醇

1ml

1ml

常溫,通風處保存

植物細胞裂解液

100 mL

200 mL

2-8

線粒體清洗液

25 mL

50 mL

2-8

DNA酶反應液

6ml

12ml

2-8

線粒體裂解液

10ml

20ml

常溫放置,如有沉淀可37℃水浴

蛋白沉淀液

7.5ml

15ml

2-8

核酸助沉劑

0.5ml

1ml

2-8

TE緩沖液

25ml

50ml

2-8

二,保存條件

本試劑盒整體保存于2-8一年,DNASE I -20℃保存。使用前,在DNase I中加入600ul50T)或者1200ul100T)的DNA酶反應液,分裝后-20保存三個月,如果超過三個月,活性可能會降低,請自行訂購DNASE I。線粒體裂解液使用前常溫保存,如有沉淀可37水浴溶解,不影響使用。

三,說明

線粒體DNA提取的關(guān)鍵是盡可能的去掉核DNA。本試劑盒利用差速離心得到比較純凈的線粒體,再利用DNA酶消化和裂解緩沖系統(tǒng)等多步驟去掉核DNA,zui后得到純凈的線粒體DNA??捎糜?/span>PCR等對純度要求較高的實驗。

本試劑盒用于從植物葉片中分離出完整而純化的線粒體。適合于田間采摘或者實驗室培養(yǎng)的植物葉片中線粒體DNA的提取制備。

四,操作步驟

準備工作:在DNASE I中加入600ul50T)或者1100ul100T)的DNA酶反應液,適當分裝后-20保存。線粒體裂解液保存于常溫,如有沉淀37℃水浴溶解,離心機溫度下降到4℃(2-8℃),如無低溫離心機,也可以常溫離心,并將離心時間為10min的改為5min,但zui后所得DNA品質(zhì)及產(chǎn)量可能會有一定影響。

1. 樣本采集前處理:無論田間自然生長還是實驗室組織培養(yǎng),采摘前須避光生長24-48小時,以減少葉片組織中糖類及葉綠體含量。取適量植物細胞裂解液,加入0.5% β-巰基乙醇,10ml 植物細胞裂解液加入50ulβ-巰基乙醇,混勻,形成植物細胞裂解液/β-巰基乙醇溶液,此溶液可2-8度保存一個月。

2. 葉片用蒸餾水清洗2-3次,濾紙吸干,有條件請用液氮研磨葉片1-2克,研磨完后,取800mg左右研磨的葉片粉,加入1.5ml預冷的植物細胞裂解液/β-巰基乙醇溶液,混勻。如果無條件(無液氮),請預冷研缽,取洗過的葉片1000 mg,用剪刀剪為碎塊放入玻璃勻漿器或者研缽中。加入1.5ml預冷的植物細胞裂解液/β-巰基乙醇溶液,冰上研磨至看不見明顯組織塊;

3. 將研磨物放置合適的離心管,4,1000× g 離心5 min;

4. 將上清轉(zhuǎn)移到一新的離心管中,在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巰基乙醇溶液,混勻,再次41000× g 離心5 min,取上清;合并兩次上清,將上清4℃ 1000× g 再次離心5 min

5.取上清,加入一新的離心管中,4, 16,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,線粒體沉淀在管底。

6. 在線粒體沉淀中加入0.5 mL  Wash Buffer重懸線粒體沉淀,41000× g 離心5 min;

7.取上清,加入一新的離心管中,4, 16,000 × g 離心10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底;

8. 加入100ul DNA酶反應液重懸線粒體,吹打均勻后,再加入10ul DNASE I溶液(見準備工作),混勻,37水浴10min。此步為消化線粒體表面吸付的核DNA4, 12,000 × g 離心5 min。盡可能的棄上清,再加入200ul TE 重懸線粒體沉淀,412,000 × g 離心5 min,洗去殘留的DNA酶。

9.得到的沉淀,用200ul TE緩沖液重懸線粒體沉淀,加入10ul  RNase A。加入200ul線粒體裂解液,輕輕混勻(不可吹打),放置1-2min,再加入150ul蛋白沉淀液,迅速混勻。4, 12,000 × g 離心5 min。此步驟可進一步去除核DNA。

10.取上清,加入一新的離心管中(如用于酶切分析,可加入此步:選用等體積的酚氯fang異戊醇25:24:1抽提一次,再用氯fang抽提一次,或者直接用氯fang抽提兩次,一般來說,此步可去掉一些微量蛋白及糖類,但會造成線粒體DNA的損失,因而用于PCR時可省,并不影響后續(xù)實驗),加入0.6倍體積的異丙醇(如無異丙醇,可加入2.5倍體積的乙醇沉淀DNA,如離心管太滿可分兩管)及5-10ul核酸核酸助沉劑,混勻,-20℃沉淀半小時左右(此步可?。?,4 12,000 × g 離心10 min。

11. 棄上清,再加入1ml  70%乙醇清洗,4, 12,000 × g 離心5min。重復用70%乙醇洗一次。

12. 棄上清,再次離心1min 吸棄上清,不要碰到管底,開蓋涼干約5-105min。

13.加入20-30ul TE緩沖液,輕彈管底,37水浴5分鐘,線粒體DNA溶解。

14. 進行DNA電泳檢測及-20保存,進行下步的實驗。

四 注意事項:
1. 以離心力g計算正確的離心速度,不同的離心機可據(jù)此精確計算離心速度。
2. 進行Western Blot2D-膠電泳,可直接在第7步的沉淀中加入上樣緩沖液裂解線粒體。

3. β-巰基乙醇有毒,請注意通風及防護

 

一般低溫度心機都有離心力顯示,如果沒有,可以用以下公式簡單的換算。

G1.11×(10-5)×R×[rpm]
G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來表示;

 [rpm] 即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。



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