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上海橋星貿(mào)易有限公司
主營產(chǎn)品： 進(jìn)口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶 |
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A3600 pGEM-T Promega試劑?
原裝*，質(zhì)量保證，現(xiàn)貨供應(yīng)
規(guī)格：1.2ug
A3600 pGEM-T Promega試劑? 產(chǎn)品描述：
組分：
pGEM®-T Vector【子貨號(hào)：A362A，包裝：1 x 1.2μg，，運(yùn)保溫度：-20℃】
Control Insert DNA【子貨號(hào)：A363A，包裝：1 x 12μl，，運(yùn)保溫度：-20℃】
2X Rapid Ligation Buffer【子貨號(hào)：C671A，包裝：1 x 200μl，，運(yùn)保溫度：-20℃】
T4 DNA Ligase【子貨號(hào)：M180A，包裝：1 x 100u，，運(yùn)保溫度：-20℃】
描述：
pGEM® -T 載體系統(tǒng)是克隆PCR 產(chǎn)物的方便系統(tǒng)。pGEM®-T載體是通過EcoRV 酶切pGEM®-5Zf(+) 載體，并在兩個(gè)3`末端加入胸腺嘧啶構(gòu)建的。pGEM®-T 載體插入位點(diǎn)3`-T 突出端可極大提高PCR 產(chǎn)物的連接效率，因?yàn)?`-T突出端可以防止載體的自身環(huán)化，并且為某些熱穩(wěn)定性聚合酶產(chǎn)生的PCR 產(chǎn)物提供匹配堿基。這些聚合酶常常以模板不依賴模式在擴(kuò)增產(chǎn)物的3` 端加上一個(gè)脫氧腺苷酸聚合物。
pGEM® -T 載體多克隆區(qū)T 突出端的兩側(cè)均有BstZI 酶切位點(diǎn)，使用BstZI 單酶消化即可釋放插入片段。也可選用適當(dāng)?shù)碾p酶消化釋放插入片段。pGEM® -T載體系統(tǒng)II 除了pGEM® -T 載體系統(tǒng)I 所有成分外，還包括JM109 感受態(tài)細(xì)胞。
pGEM®-T和pGEM®-T Easy 載體系統(tǒng)可用于PCR產(chǎn)物的克隆。這兩種載體是通過 EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM® -T Easy載體，并在3’末端加入胸腺嘧啶構(gòu)建的。插入位點(diǎn)3’-T突出端可提高PCR產(chǎn)物的連接效率，因?yàn)?’-T突出端可以防止載體的自身環(huán)化，并且為熱穩(wěn)定性聚合酶產(chǎn)生PCR產(chǎn)物提供匹配堿基。這些聚合酶常常以不依賴模板方式在擴(kuò)增產(chǎn)物的3’端加上一個(gè)脫氧腺苷酸混合物。 pGEM®-T和pGEM®-T Easy高拷貝數(shù)載體包含有T7和SP6 RNA聚合酶啟動(dòng)子，其側(cè)翼和多克隆位點(diǎn)區(qū)相接，多克隆位點(diǎn)區(qū)位于β半乳糖苷酶的α肽編碼區(qū)內(nèi)。α肽插入失活允許在指示培養(yǎng)基用顏色直接篩選重組克隆。另外這兩個(gè)載體的多克隆位點(diǎn)區(qū)的限制性酶切位點(diǎn)適用于采用Promega公司Erase-a-Base®系統(tǒng)（產(chǎn)品目錄號(hào)#E5750）產(chǎn)生一系列巢式缺失體。
pGEM®-T和pGEM®-T Easy 載體的多克隆位點(diǎn)區(qū)含有一些這樣的限制性酶切位點(diǎn)，采用這些酶進(jìn)行單酶切消化即可釋放插入片段。如pGEM®-T Easy 載體多克隆區(qū)的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位點(diǎn)。而pGEM®-T 載體多克隆區(qū)只有一種這樣的酶切位點(diǎn)BstZⅠ。這兩種載體也可選用適當(dāng)?shù)碾p酶切消化釋放插入片段。
pGEM®-T和pGEM®-T Easy 載體含有絲狀噬菌體f1復(fù)制起始子，可用于制備單鏈DNA
| 產(chǎn)品 | 包裝 | 目錄號(hào) |
pGEM®-T 載體系統(tǒng)Ⅰ | 20個(gè)反應(yīng) | A3600 |
| 包括： | ||
| 1.2µg pGEM®-T 載體(50ng/µl) | ||
| 12µl 插入DNA對照（4ng/µl） | ||
| 100 U T4DNA連接酶 | ||
| 200µl T4DNA連接酶的2×快速連接緩沖液 | ||
| 1 操作手冊 | ||
特點(diǎn):
快速連接：使用2X 快速連接緩沖液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使連接反應(yīng)在室溫下1 小時(shí)內(nèi)完成。
藍(lán)/ 白篩選：載體包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶啟動(dòng)子，分別位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽編碼區(qū)內(nèi)多克隆位點(diǎn)的兩側(cè)。α - 肽的插入失活允許在指示培養(yǎng)基上用顏色直接篩選重組克隆。
f1 復(fù)制起始位點(diǎn)：可用于制備單鏈DNA。
原廠資料：
The pGEM®-T Vector Systems are convenient systems to clone PCR products. The pGEM®-T Vector is prepared by cutting the pGEM®-5Zf(+) Vector with EcoRV and adding a 3´ terminal thymidine to both ends. These single 3´-T overhangs at the insertion site greatly improve the efficiency of ligation of a PCR product into the plasmid by preventing recircularization of the vector and providing a compatible overhang for ligation of PCR products generated by thermostable polymerases that add a single deoxyadenosine, in a template-independent fashion, to the 3´-ends of amplified fragments.
The multiple cloning site is flanked by recognition sites for the restriction enzyme BstZI, allowing release of the insert by a single-enzyme digestion. Alternatively, a double digestion may be used to release the insert from the vector. The pGEM®-T Vector System II contains JM109 Competent Cells in addition to all of the pGEM®-T Vector System I components.
For more information, see the Cloning and PCR chapters of the Protocols & Applications Guide.
注意事項(xiàng)：
1． 在使用pGEM®-T 和pGEM®-T Easy 載體連接時(shí)只能使用本系統(tǒng)提供的
Promega 公司T4 DNA連接酶。其他商用的T4 DNA連接酶可能具有外切
酶活力，造成載體的末端胸腺嘧啶被除去。
2． ２×快速連接緩沖液含有ATP，在溫度波動(dòng)時(shí)ATP易降解?？蓪⒕彌_液分
裝成一次用量的小管，這樣可避免反復(fù)凍融及經(jīng)常的溫度變化。
3． 在每次使用２×快速連接緩沖液時(shí)一定要用混懸器混勻。
4． 長孵育時(shí)間可增加轉(zhuǎn)化子的數(shù)目，一般4℃孵育通宵可得到更多的轉(zhuǎn)化子。
5.一定要使用高效率的感受態(tài)細(xì)胞（1×108cfu/µg DNA）進(jìn)行轉(zhuǎn)化，建議使用JM109 高效感受態(tài)細(xì)胞（產(chǎn)品目錄號(hào)：L2001）
? 相關(guān)產(chǎn)品列表：
| Promega 系列 | ||
| 序號(hào) | 貨號(hào) 名稱 | 規(guī)格 |
| 1 | M1801 T4連接酶 | 100U |
| 2 | M1804 T4連接酶 | 500U |
| 3 | M1701 M-MLV | 10000U |
| 4 | M1705 M-MLV | 50000U |
| 5 | M5101 AMV | 300U |
| 6 | M5108 AMV | 1000U |
| 7 | M7741 Pfu | 100U |
| 8 | M7745 Pfu | 500U |
| 9 | C1101 Olig(dt)15 Primer | 20ug |
| 10 | M3001 Go-Taq | 100U |
| 11 | M3005 Go-Taq | 500U |
| 12 | M3008 Go-Taq | 2500U |
| 13 | U1511 dNTP | 200μl |
| 14 | U1515 dNTP | 1000μl |
| 15 | A1360 pGEM-T easy | 1.2ug |
| 16 | A3600 pGEM-T | 1.2ug |
| 17 | C1181 Random Primers | 20μg |
| 18 | N2511 Recombinant RNasin | 2500U |
| 19 | N2515 Recombinant RNasin | 10000U |
| 20 | N2611 RNasin Plus | 2500U |
| 21 | N2615 RNasin Plus | 10000U |
| 22 | N2111 RNasin | 2500U |
| 23 | N2115 RNasin | 10000U |
| 24 | M1871 TdT | 300U |
| 25 | M1875 TdT | 1500U |
| 26 | M2825 CIAP | 1000U |
| 27 | M1821 CIAP | 1000U |
| 28 | M2201 Klenow I | 150U |
| 29 | M2206 Klenow I | 500U |
| 30 | M4211 T4 DNA Polymerase | 100U |
| 31 | M4215 T4 DNA Polymerase | 500U |
| 32 | M4101 T4 Polynucleotide Kinase | 100U |
| 33 | M4103 T4 Polynucleotide Kinase | 1000U |
