目錄:和元李記（上海）生物技術有限公司>>細胞生物學>>細胞凋亡>> AC12L064Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒（綠色）
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 200T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | AC12L064 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 通過測量Caspase 8的活性而用于細胞凋亡檢測 |
產(chǎn)品信息
Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒是通過測量Caspase 8的活性而用于細胞凋亡檢測的。Caspase 8 是一種Caspase蛋白，CASP8基因所編碼。在神經(jīng)元變性疾病中，例如亨廷頓綜合癥，caspase 8扮演著重要角色。Caspase 8已被證明具有底物選擇性，其肽基序為Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。該試劑盒使(Ac-IETD)2-R110作為熒光指示器來檢測caspas-8的活性。通過caspas-8的切割R110肽產(chǎn)生強綠色熒光，其發(fā)射光在520 nm和530 nm之間，激發(fā)光為480 nm和500 nm之間。這種特性使得試劑盒能適合于FITC濾光器。
產(chǎn)品優(yōu)勢
本試劑盒提供所有必需組分和合適的操作流程。該實驗結果穩(wěn)定，快速且適應高通量篩選。它不僅能夠定量凋亡細胞中caspas-8的活性還能篩選caspas-8的抑制劑。
技術資料
1.Ex(nm)：500
2.Em(nm)：522
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒（綠色） | AC12L064 | 200T | 2980 |
產(chǎn)品組分
| 產(chǎn)品組分 | 規(guī)格 |
| A: Caspase 3/7 Substrate (200X Stock Solution) | 50ul*2 |
| B: Assay Buffer | 20ml |
實驗方案
1.用測試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細胞。
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）。
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時。
4.監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（截止= 515 nm）。
5.將50μLCaspase8底物（組分A）加入10mL測定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液（溶液需避光保存）。
【注】：Caspasae 8工作液不穩(wěn)定，請及時使用。
操作步驟
1.通過將10μL/孔的10X測試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔（沒有細胞的培養(yǎng)基），加入相同量的化合物緩沖液。
2.將細胞板在5％CO 2,37℃培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時間（對于用喜樹堿或星形孢菌素處理的Jurkat細胞，4-6小時）以誘導細胞凋亡。
3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。
4.將板在室溫下孵育30分鐘至1小時，避光。
【注】：如果需要，在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑，以確認對caspase 8樣活性的抑制作用。
5.以800rpm離心細胞板（特別是對于非貼壁細胞）2分鐘（制動關閉）。
6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監(jiān)測熒光增加。
數(shù)據(jù)分析
圖1.使用Cell Meter Caspase 8活性細胞凋亡檢測試劑盒檢測Jurkat細胞中的caspase 8活性
在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的一天以200,000個細胞/90μL/孔接種Jurkat細胞。 用或不用20μM喜樹堿處理細胞4小時。 加入半胱天冬酶8工作溶液（100μL/孔）并在室溫下溫育1小時。 使用FlexStation 酶標儀（Molecular Devices）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止值= 515nm）下測量熒光強度。
注意事項
該產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
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