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Cell Cycle and Apoptosis Kit(細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒)

產(chǎn)品描述
　　細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即 PI staining)方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。
　　碘化丙啶(Propidium，簡(jiǎn)稱 PI)是一種雙鏈 DNA 的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈 DNA 結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈 DNA 的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的 DNA 被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行 DNA 含量測(cè)定，然后根據(jù) DNA 含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。
　　碘化丙啶染色后，假設(shè) G0/G1 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1， 那么含有雙份基因組 DNA 的 G2/M 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為 2，正在進(jìn)行 DNA 復(fù)制的 S 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1-2 之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生 DNA fragmentation 導(dǎo)致部分基因組 DNA fragmentation 在染色過(guò)程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于 1，在流式檢測(cè)的熒光圖上出現(xiàn)所謂的 sub-G1 峰，即凋亡細(xì)胞峰。
　　細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂， 產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對(duì)前向角光散射的能力顯著降低，對(duì)側(cè)向光散射的能力增加或沒(méi)有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號(hào)均降低。因此可通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。
　　本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測(cè)。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品組分

保存方法
　　冰袋運(yùn)輸，-20℃保存，有效期見(jiàn)外包裝。碘化丙啶染色液（20×）需避光保存。
使用方法
1.細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
對(duì)于貼壁細(xì)胞：
（1）首先小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到離心管內(nèi)備用。
（2）用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來(lái)時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。
（3）再次收集到離心管內(nèi)，用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細(xì)胞。
注：對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約 1 mL 冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：
（1）用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細(xì)胞。注：對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。
（2）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約 1 mL 冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
2.細(xì)胞固定：
（1）加入 1 mL 冰浴預(yù)冷 75-80%乙醇，輕輕吹打混勻，對(duì)于易成團(tuán)的細(xì)胞，要一邊加入乙醇一邊震蕩混勻。如果細(xì)胞株本身極易成團(tuán)，可以先將細(xì)胞充分重懸在250 μL 的 PBS 中，一邊逐滴加入 750 μL 的無(wú)水乙醇。乙醇終濃度控制在 75%左右即可，PBS 體積及無(wú)水乙醇體積可按比例調(diào)整。注：切記是先重懸在 PBS 中，不能重懸在培養(yǎng)基中再加無(wú)水乙醇！
（2）將 75-80%的乙醇重懸的樣品置于-20oC，固定過(guò)夜。（如著急檢測(cè)，-20℃ 固定 1-2 h 也可以進(jìn)行檢測(cè)；乙醇固定的樣品可以在-20℃保存1個(gè)月）
（3）1000 g 左右離心 3-5 min， 沉淀細(xì)胞。注：對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 75-80%乙醇，以避免吸走細(xì)胞。加入約 1 mL 冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞。再次離心沉淀細(xì)胞，盡可能將上清去除干凈。
3.碘化丙啶染色液的配制：
參考下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液：

【注】：配制好的碘化丙啶染色液短時(shí)間內(nèi)可以 4oC 保存，宜當(dāng)日使用。
4.染色：
（1）每管細(xì)胞樣品中加入 0.5 mL 碘化丙啶染色液， 緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀，室溫避光孵育 15-30 min。（2）隨后可以 4oC 或冰浴避光存放，染色完成后宜在 24 小時(shí)內(nèi)完成流式檢測(cè)（建議能在當(dāng)日完成流式檢測(cè)）。
5.流式檢測(cè)和分析：
用流式細(xì)胞儀在 535 nm 激發(fā)波長(zhǎng)， 615 nm 發(fā)射波長(zhǎng)的通道檢測(cè)紅色熒光，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞 DNA 含量分析和光散射分析。
注意事項(xiàng)：
1.熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，保存和使用過(guò)程中請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2.碘化丙啶對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
3.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。