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RIPA（強(qiáng)）細(xì)胞裂解液（帶抑制劑），通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì)，是一種經(jīng)典的動物組織/細(xì)胞快速裂解液。

RIPA（強(qiáng)）細(xì)胞裂解液（帶抑制劑）

產(chǎn)品描述
　　RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì)，是一種經(jīng)典的動物組織/細(xì)胞快速裂解液。對細(xì)胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，適用于PAGE、Western Blotting和免疫沉淀(IP)的研究。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類?？梢愿鶕?jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需要選擇，具體選擇標(biāo)準(zhǔn)見下表1。
訂購信息

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
RIPA（強(qiáng)）細(xì)胞裂解液（帶抑制劑）	AP01L013	50 mL
RIPA（強(qiáng)）細(xì)胞裂解液（帶抑制劑）	AP01L014	100 mL

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品組成	包裝規(guī)格
AP01L013	RIPA（強(qiáng)）細(xì)胞裂解液	50 mL
	PMSF 溶液（100 mM）	1 mL
	磷酸酶抑制劑II cocktail（50×）	1 mL
	產(chǎn)品說明書	一份
AP01L014	RIPA（強(qiáng)）細(xì)胞裂解液	100 mL
	PMSF 溶液（100 mM）	1 mL
	磷酸酶抑制劑II cocktail（50×）	2*1 mL
	產(chǎn)品說明書	一份

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品

(1) 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF (CAT:AP02L014)，使PMSF的終濃度為1 mM。

(2) 細(xì)胞裂解

對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2 s后，細(xì)胞就會被裂解。
對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混勻，充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，需分裝成50~100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。具體RIPA裂解液的使用量參照表2。

(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2. 對于組織樣品

(1) 把組織剪切成細(xì)小的碎片；

(2) 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM；

(3) 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量，具體RIPA裂解液的使用量參照表2。

(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

(5) 充分裂解后，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事項(xiàng)

(1) RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

(2) RIPA（強(qiáng)）裂解液含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定蛋白。

(3) 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

(4) 通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。

表1：不同RIPA裂解液的選擇標(biāo)準(zhǔn)

產(chǎn)品應(yīng)用	RIPA裂解液(強(qiáng))	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
裂解強(qiáng)度	強(qiáng)	中	溫和
膜蛋白的提取	很好	較好	一般
胞漿蛋白的提取	很好	很好	很好
核蛋白的提取	很好	較好	較好
胞漿磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子提取	很好	很好	很好
主要用途	WB, IP	WB, IP	WB, IP, co-IP

表2: RIPA裂解液的使用量

樣品來源	培養(yǎng)容器	收獲細(xì)胞數(shù)	RIPA用量	可制備樣品數(shù)
細(xì)胞	6孔板	2.5 x 10⁶	150-250 μL	400~600
	60 mm培養(yǎng)板	5.2 x 10⁶	300-500 μL	200~300
	90 mm培養(yǎng)板	12.2 x 10⁶	500-1000 μL	100~200
	25 cm²培養(yǎng)瓶	5 x 10⁶	300-500 μL	200~300
	75 cm²培養(yǎng)瓶	2 x 10⁷	1000-2000 μL	50~100
組織	20 mg組織塊	2.5 x 10⁶	150-250 μL	400~600

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