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溴化氰活化4B瓊脂糖凝膠產(chǎn)品說明書

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溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠是一種活化中間體填料,它是通過溴化氰和瓊脂糖上面的羥基反應(yīng)生成活化的氰酸酯基團。蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸等可以偶聯(lián)到溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠上。

它具有以下優(yōu)點:

偶聯(lián)條件溫和,效率高;可偶聯(lián)含有氨基的配體,應(yīng)用范圍廣。

產(chǎn)品指標(biāo)

產(chǎn)品牌號

溴化氰活化4B瓊脂糖凝膠

溴化氰活化6B瓊脂糖凝膠

基質(zhì)

seplite 4B

seplite 6B

顆粒大小

平均粒徑90μm(50-160μm)

偶聯(lián)能力

20~60mgα-胰凝乳蛋白酶原/ml凝膠

大線性流量

75cm/h(25℃),直徑1.6cm色譜柱,5cm柱床高

高溫高壓

不耐受

pH穩(wěn)定性

2–11

化學(xué)穩(wěn)定性

常見溶液中可以保持穩(wěn)定。可以耐受非離子型去污劑、變性溶劑,如8 M尿素和6 M鹽酸胍。也可以耐受50%二甲基甲酰胺和50%二氧六環(huán)等有機溶劑。

保存

凍干粉,2~8℃,干燥

 

使用注意事項:
    溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠是以添加劑的形式凍干處理得到的。這些添加劑在填料螯合所需的配體前必須在低pH(pH 2–3)條件下進行清洗。活化后的活性基團也應(yīng)該使用低pH值(pH值2–3)保存,而在高pH值則會出現(xiàn)降解。
    稱取所需量的凍干粉(1 g凍干粉可獲得3~5ml終體積的填料),使用1mM HCl溶脹。填料會很快膨脹,再用1mM HCl在玻璃砂芯漏斗(G3)中進行清洗15min。每克凍干粉添加約200ml 1mM的HCl溶脹,實際可以分次添加。
 

一般配體偶聯(lián)的過程如下:
(1)將所需要偶聯(lián)的配基溶解到 pH 8.3含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/LNaHCO3 緩沖溶液中,加入溶脹好的溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠。
(2)在室溫中攪拌反應(yīng)2~4小時或者在4℃下過夜反應(yīng)。
(3)反應(yīng)*后,用5倍反應(yīng)體積的偶聯(lián)緩沖液洗滌掉其中多余的配體,10倍體積的水洗。
(4)將反應(yīng)完洗滌過的凝膠懸浮到水中,加入乙醇胺(1mol/L)或者pH8.0的Tris-HCl緩沖液,在常溫少攪拌反應(yīng)2小時,以消除殘余活性基團。
(5)用含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L醋酸鹽緩沖液(PH 4.0)和含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L Tris-HCl緩沖液(PH 8)交替洗滌,至少重復(fù)以上循環(huán)洗滌3次。用10倍柱體積的PBS洗滌。

 

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