今天開講之前，先給大家看一組九宮格圖，開開眼界~~
這是將色譜柱的入口端打開后的樣子，也就是色譜柱中先接觸到樣品的填料。
正常的色譜柱入口端填料絕大多數(shù)應(yīng)該是白白的、平整的，而這些是受到嚴(yán)重污染的色譜柱——變色、堵塞、雜質(zhì)蓄積......
OMG！
柱子造的都沒“柱”樣了！
那怎么辦？
如何避免色譜柱過早地“夭折”呢？
辦法還是有滴~~
通常，在分析柱前面，安裝一支保護(hù)柱就能大大減少損失。
那么，今天我們一起來學(xué)習(xí)一下，保護(hù)柱的重要性吧。
1、 為什么要使用保護(hù)柱？
2、 哪些樣品需要使用保護(hù)柱？
3、 保護(hù)柱會(huì)不會(huì)影響分離效果？
4、 如何選擇保護(hù)柱？
5、保護(hù)柱的使用及注意事項(xiàng)有哪些？
01
為什么使用保護(hù)柱呢？
樣品上機(jī)檢測(cè)前，一般會(huì)經(jīng)前處理去除雜質(zhì)，但是不能*避免，來自于樣品及色譜系統(tǒng)的微小的固體顆粒物、色素雜質(zhì)、未沉淀的蛋白等，可能會(huì)滯留在色譜柱中，從而導(dǎo)致色譜柱耐用性差、壽命縮短。
保護(hù)柱是安裝在分析柱之前的小柱，能起到分離凈化的作用，大大降低分析柱受污染的程度，延長(zhǎng)分析柱使用壽命，因此為您節(jié)省很多的耗材費(fèi)用。
02
哪些樣品需要使用保護(hù)柱？
常規(guī)的液相色譜檢測(cè)中均需要使用保護(hù)柱，特別是對(duì)于食品、中藥、天然產(chǎn)物、合成中間體、復(fù)雜制劑及血漿等生物樣品的檢測(cè)，因待測(cè)基質(zhì)的復(fù)雜性，可能會(huì)導(dǎo)致色譜系統(tǒng)壓力升高、色譜柱堵塞、填料變色、測(cè)試結(jié)果不準(zhǔn)確等各種影響。
03
保護(hù)柱會(huì)不會(huì)影響分離效果？
通常來講，理想的保護(hù)柱填料與分析柱填料一致，具有相同的選擇性，被測(cè)物基本上全被洗脫出來，不會(huì)影響待測(cè)物的響應(yīng)值。
保護(hù)柱柱長(zhǎng)選擇恰當(dāng)?shù)脑?，不?huì)產(chǎn)生峰擴(kuò)散，也基本不會(huì)引起分離度的降低。
圖1 是安裝卡套式保護(hù)柱后的對(duì)比色譜圖，保留時(shí)間略微有延遲（原因是安裝了保護(hù)柱，色譜柱相當(dāng)于長(zhǎng)了一點(diǎn)點(diǎn)）。總體來講，卡套式保護(hù)柱對(duì)分析結(jié)果基本無影響。
圖1
【液相條件】
色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGIII-H S3; 2.0 mm i.d. x 100 mm
保護(hù)柱：CAPCELL PAK C18 MGIII-H S3; 2.1 mm i.d. x 5 mm
流動(dòng)相：60%乙腈
流 速：0.5 mL/min
溫 度：40℃
檢 測(cè)：UV 254 nm
樣 品：萘（峰4）
04
如何選擇保護(hù)柱？
1、保護(hù)柱與分析柱應(yīng)具有相同填料、相同粒徑、相同內(nèi)徑，以確保選擇性一致（同一個(gè)品牌）。
2、一般長(zhǎng)度為10mm的保護(hù)柱可以起到充分的保護(hù)作用，過長(zhǎng)的話可能會(huì)引起待測(cè)物的譜帶擴(kuò)張。
3、盡量選擇可更換柱芯的的保護(hù)柱，柱芯價(jià)格相對(duì)便宜，易于使用和維護(hù)，而且死體積小。
4、如果是用于UHPLC柱，還要考慮一下保護(hù)柱的耐壓能力。
05
保護(hù)柱的使用及注意事項(xiàng)有哪些？
安裝
1、卡套式保護(hù)柱一般標(biāo)注液流方向，請(qǐng)按照色譜柱標(biāo)簽所示方向進(jìn)行安裝，盡量不要雙向混用。
2、卡套式保護(hù)柱可以更換柱芯，對(duì)于CAPCELL PAK 系列保護(hù)柱，即使柱芯內(nèi)徑不同，只要柱芯的長(zhǎng)度相同，柱套既可通用。
3、保護(hù)柱與卡套組裝好后，請(qǐng)直接連接在色譜柱入口端。一般用手?jǐn)Q緊卡套即可，如有漏液發(fā)生，可再使用扳手?jǐn)Q緊30°，用力太過有可能導(dǎo)致壓環(huán)變形。
使用注意事項(xiàng)
1、專柱，避免保護(hù)柱成為不同項(xiàng)目的交叉污染源。
2、當(dāng)色譜峰的理論塔板數(shù)下降，柱壓上升，或是關(guān)鍵分離度下降時(shí)，都應(yīng)該及時(shí)更換保護(hù)柱。
3、不慎發(fā)生強(qiáng)污染時(shí)，可以將分析柱卸下，單獨(dú)沖洗保護(hù)柱，可以使污染物更快的從保護(hù)柱中流出。
4、保護(hù)柱或柱芯一般不建議超聲清洗，因可能對(duì)填料表面修飾有影響，當(dāng)柱效下降時(shí)直接更換柱芯。
后，再給大家介紹2款靠譜的保護(hù)柱吧，一款是應(yīng)用于HPLC的保護(hù)柱，另一款是應(yīng)用于UHPLC的保護(hù)柱。
TIPs 知識(shí)擴(kuò)展
1 CAPCELL PAK 卡套式保護(hù)柱 （應(yīng)用于HPLC）
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、應(yīng)用于高效液相色譜，CAPCELL PAK 系列分析柱均有配套的保護(hù)柱。
2、CAPCELL PAK 保護(hù)柱，即使柱芯內(nèi)徑不同，只要柱芯的長(zhǎng)度相同既可通用。
3、只對(duì)單價(jià)較低的柱芯進(jìn)行更換即可實(shí)現(xiàn)對(duì)分析柱的保護(hù)。
.2 CAPCELL EXP 卡套式保護(hù)柱 （應(yīng)用于UHPLC）
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、高耐壓 100 MPa，可用于超高效液相色譜。
2、幾乎無擴(kuò)散，對(duì)分離的影響降低到極低限度。
3、可直接連接到色譜柱上，不會(huì)產(chǎn)生死體積的影響。
4、不需要工具，用手?jǐn)Q緊即可簡(jiǎn)便連接。
