TF-1細(xì)胞人血液白血病細(xì)胞
1) 來(lái)源:蒂科生物細(xì)胞庫(kù)
2)阿 形態(tài):懸浮 淋巴母細(xì)胞樣
3) 含量:>1x106 個(gè)/mL
4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
6) 運(yùn)輸:順豐發(fā)貨
培養(yǎng)條件:
培養(yǎng)基:RPMI1640+ 10% FBS+2ng/mL 重組人GM-CSF(推薦HAKATA貨號(hào):HN-FBS-500)
溫度:37℃ 氣相:95%空氣,5%二氧化碳
傳代:
1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無(wú)菌操作臺(tái),打開(kāi)瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代,一般2到3天換一次液;
2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%,需要對(duì)其進(jìn)行傳代,傳代比例為1:2到1:4;
3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(diyi次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀(guān)察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為zuijia消化時(shí)間,記錄zuijia消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。
凍存:
建議使用本公司無(wú)血清細(xì)胞凍存液貨號(hào):H-W-100,用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。
保存條件:液氮存儲(chǔ)
溫馨提示:(常見(jiàn)問(wèn)題,處理方式)
T25瓶為例;
1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注:diyi次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶(hù)需要自己決定。
細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
常見(jiàn)熱賣(mài)細(xì)胞:
HeLa 人宮頸癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
143B 人骨肉瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
293T 人胚腎細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
A2780 人卵巢癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
A549 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
A673 人尤因肉瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 多邊形
AGS 人胃腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
BGC823 人胃腺癌細(xì)胞(低分化) RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
C33A 人宮頸癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
CACO2 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 DMEM+20% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
COLO205 人結(jié)腸癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 半懸浮 上皮細(xì)胞樣
DU145 人前列腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 McCoy's 5A+10%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H1650 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
H460 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
HACAT 人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞 DMEM+15% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
HCT116 人結(jié)腸癌細(xì)胞 McCoy's 5A+10%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
HEK293 人胚腎細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
HEPG2 人肝癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
HGC27 人胃癌細(xì)胞(未分化) DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞 McCoy's 5A+10%FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 ECM 貼壁 上皮細(xì)胞樣
KYSE150 人食道癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
L02(HL7702)(QSG-7701) 人正常肝細(xì)胞 RPMI-1640+20% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
LOVO 人結(jié)腸癌細(xì)胞 F12K+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
MCF-10A 人正常乳腺上皮細(xì)胞 DMEM/F12(1:1) 培養(yǎng)基+胰島素(10ug/ml)+表皮生長(zhǎng)因子(20ng/ml)+100ng/ml霍亂病毒+0.5ug/ml氫d化d可d的d松+5% 馬血清 貼壁 上皮細(xì)胞樣
MCF7 人乳腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS+10μg/ml 胰島素 貼壁 上皮細(xì)胞樣
LX-2 人肝星狀細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
MDA-MB-468 人乳腺癌細(xì)胞 L-15+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣
TF-1細(xì)胞人血液白血病細(xì)胞